[发明专利]一种SD大鼠血浆中新化合物WSJ-557的血药浓度定量分析方法

说明书

一种SD大鼠血浆中新化合物WSJ‑557的血药浓度定量分析方法，包括以下步骤：(1)在WSJ‑557灌胃给药后的SD大鼠血浆中，加入甲醇和内标工作液，涡旋后加入乙酸乙酯进行液液萃取，再进行涡旋，离心，并取上清；(2)采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱，柱温：40℃；超高效液相系统采用通用型二元高压泵和进样器，采用甲醇‑醋酸铵水溶液的混合液为流动相，梯度洗脱；(3)采用离子源为ESI离子源，多反应监测模式(MRM)进行正离子检测。定量分析的离子分别为：WSJ‑557：m/z316.1→260.0，m/z237.0→194.0，碰撞能量为15eV。本发明具有专属性强，灵敏度高，样品取样少、预处理简单、快速，分析周期短等优点，特别适用于SD大鼠血浆中WSJ‑557的血药浓度测定和药代动力学研究。

技术领域

本发明涉及药物分析学临床前药代动力学研究范畴，尤其涉及一种SD大鼠血浆中化合物WSJ-557的血药浓度定量分析方法。

背景技术

控制血尿酸水平在痛风防治中起着关键的作用，而降尿酸的药物中黄嘌呤氧化酶抑制剂的种类很少并且副作用多。WSJ-557是一个全新的非嘌呤类黄嘌呤氧化酶抑制剂，其体外的药效学实验表明WSJ-557(IC50＝0.003μM)的抑制活性比近几年刚上市的非布司他(IC50＝0.01μM)高很多。注：IC50(Half maximal inhibitory concentration)是指被测量拮抗剂的半抑制浓度(或称半抑制率)。

化合物WSJ-557的制备方法可参阅申请日为2012-08-07、申请号为201210279511.2、专利名称为“具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的化合物及其盐、制备方法和用途”的发明专利。从该专利文中可知，WSJ-557的化学名称是2-(3-氰基-4-仲丁氧基)苯基-1-羟基-4-甲基-1H-咪唑-5-甲酸，化学结构式为：

由于WSJ-557是创新药物，其生物样品的测定方法国内外尚无文献报道，为了能够开展关于其在体内的吸收、分布、代谢、排泄有关特征的动物及人体药代动力学研究，有必要建立一个灵敏度高、方便快捷的WSJ-557血药浓度定量分析方法。

发明内容

本发明目的在于提供一种操作简便、快速、血浆用量少、专属性强、准确度高、重现性好、分析时间短、可得到满意的峰形及色谱保留时间的SD大鼠血浆中新化合物WSJ-557的血药浓度定量分析方法。

为实现上述目的，采用了以下技术方案：本发明方法中血浆样品采自SD大鼠，选取化合物WSJ-557为药品；所述方法是将血浆样品预处理后，在混合流动相梯度洗脱下，经色谱柱分离后，采用二级质谱检测器检测；具体步骤如下：

步骤1，血浆样品预处理；

在WSJ-557灌胃给药后的SD大鼠血浆中，加入甲醇和内标工作液，涡旋后加入乙酸乙酯进行液液萃取，再进行涡旋，离心，并取上清；

步骤2，样品分离；

采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱，其填料为ACQUITY UPLC^TM BEH C₁₈(2.1mm×50mm,1.7μm)，柱温：40℃；超高效液相系统采用通用型二元高压泵和进样器，采用甲醇-醋酸铵水溶液的混合液为流动相，梯度洗脱；

步骤3，二级质谱仪检测样品；

采用离子源为ESI离子源，多反应监测模式(MRM)进行正离子检测；定量分析的离子分别为：WSJ-557：m/z316.1→260.0，IS：m/z237.0→194.0，最佳碰撞能量为15eV。

进一步的，所述的血浆样品采至7～9周、体重为200g±50g的体成熟SD大鼠；经眼眶静脉丛下取血0.3mL，经高速离心机离心取上清液制成；取样量为100μL。

进一步的，步骤1中，所述甲醇为色谱级甲醇溶液，其加入血浆的作用是沉淀血浆蛋白。