[发明专利]一种自体软骨细胞的原代分离方法在审
| 申请号： | 201710053459.1 | 申请日： | 2017-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN106635971A | 公开（公告）日： | 2017-05-10 |
| 发明（设计）人： | 陈海佳;葛啸虎;王一飞;罗二梅;王小燕 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 510000 广东省广州市开发区广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 软骨 细胞 分离 方法 | ||
1.一种自体软骨细胞的原代分离方法，其特征在于，自体软骨组织预处理后，剪碎，先用胰蛋白酶-EDTA溶液处理，然后用Ⅱ型胶原酶溶液消化，待大部分细胞游离时，细胞筛网过滤，离心弃上清，收集细胞用DMEM高糖完全培养基重悬后培养3天，收集贴壁细胞即得原代软骨细胞。
2.根据权利要求1所述的原代分离方法，其特征在于，所述预处理为用含有双抗的PBS溶液进行清洗。
3.根据权利要求2所述的原代分离方法，其特征在于，所述双抗为青霉素和链霉素的混合物；青霉素终浓度为100U/ml，链霉素的终浓度为100U/ml。
4.根据权利要求1所述的原代分离方法，其特征在于，按g/ml计，所述胰蛋白酶的终浓度为0.25％，所述EDTA的终浓度为0.02％。
5.根据权利要求1所述的原代分离方法，其特征在于，所述处理时间为5～10min。
6.根据权利要求1所述的原代分离方法，其特征在于，所述Ⅱ型胶原酶的终浓度为0.1v/v％～0.2v/v％。
7.根据权利要求1所述的原代分离方法，其特征在于，所述消化为4℃消化过夜。
8.根据权利要求1所述的原代分离方法，其特征在于，所述细胞筛网为200目不锈钢细胞筛网。
9.根据权利要求1所述的原代分离方法，其特征在于，所述离心为1500rpm离心2次，每次5min。
10.根据权利要求1所述的原代分离方法，其特征在于，所述DMEM高糖完全培养基为含10v/v％的胎牛血清、1v/v％的双抗和10ng/ml的bFGF溶液的DMEM高糖基础培养基。
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