[发明专利]一种sgRNA及其构建的慢病毒载体和应用在审
| 申请号： | 201710054835.9 | 申请日： | 2017-01-24 |
| 公开（公告）号： | CN106801056A | 公开（公告）日： | 2017-06-06 |
| 发明（设计）人： | 姚永超;陈小平;余松林;肖宏奎;李姣姣;秦莉;赵思婷 | 申请（专利权）人： | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/867;C12N15/66;C12N7/01;A61K48/00;A61P31/18 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司11332 | 代理人： | 巩克栋,侯桂丽 |
| 地址： | 510663 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 sgrna 及其 构建 病毒 载体 应用 | ||
1.一种sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的核酸序列如SEQ ID NO.1-2所示。
2.根据权利要求1所述的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的启动子为U6启动子。
3.一种SIV-CRISP/cas9慢病毒载体，其特征在于，所述慢病毒载体包含如权利要求1或2所述的sgRNA的核酸序列。
4.一种如权利要求3所述的SIV-CRISP/Spcas9慢病毒载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)使用HpaI和ClaI双酶切pCL20cSLFR MSCV-GFP载体，得到酶切后的载体；
(2)PCR扩增U6启动子-sgRNA-EFS启动子-Cas9序列，通过末端重组的方式克隆到步骤(1)酶切后的载体上，得到所述SIV-CRISP/Spcas9慢病毒载体。
5.根据权利要求4所述的方法，步骤(2)所述的PCR扩增的引物的核酸序列如SEQ ID NO.3-4所示。
6.一种重组慢病毒，其特征在于，将包含如权利要求3所述的SIV-CRISP/cas9慢病毒载体与包装辅助质粒pCAG4-RTR-SIV、pCAG-SIVgprre和pCAG-VSVG共转染哺乳细胞得到的重组慢病毒。
7.根据权利要求6所述的重组慢病毒，其特征在于，所述哺乳细胞为HEK293T细胞。
8.一种如权利要求3所述的SIV-CRISP/cas9慢病毒载体用于敲除CXCR4和/或CCR5基因。
9.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括如权利要求3所述的慢病毒载体和/或如权利要求6所述的重组慢病毒。
10.如权利要求3所述的慢病毒载体、如权利要求6所述的重组慢病毒或如权利要求9所述的组合物在制备抗艾滋病药物中的应用。
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