[发明专利]细胞色素P450突变蛋白及其应用

权利要求书

1.一种细胞色素P450的突变蛋白，其特征在于，所述的突变蛋白为非天然蛋白，且所述突变蛋白具有催化生成原人参二醇的催化活性，并且所述突变蛋白在野生型的细胞色素P450的对应于SEQ ID NO.1的选自下组的与酶催化活性相关的核心氨基酸发生突变：

第91位脯氨酸P，并且第91位脯氨酸P突变为组氨酸H；或

所述的突变蛋白缺失SEQ ID NO. 1中1-4位，且第18位亮氨酸L突变为异亮氨酸I，所述细胞色素P450的突变蛋白催化达玛烯二醇DM反应生成原人参二醇PPD。

2.如权利要求1所述的突变蛋白，其特征在于，所述的突变为P91H。

3.如权利要求1所述的突变蛋白，其特征在于，所述细胞色素P450的突变蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.6或8所示。

4.一种多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸编码权利要求1所述的突变蛋白。

5.如权利要求4所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸选自下组：

(a)编码如SEQ ID NO.6或8所示多肽的多核苷酸；

(b)序列如SEQ ID NO.19或21所示的多核苷酸；

(c)核苷酸序列与SEQ ID NO.19或21所示序列的同源性≥95%，且编码SEQ ID NO.6、8任一所示多肽的多核苷酸。

6.一种载体，其特征在于，所述的载体含有权利要求4所述的多核苷酸。

7.一种工程化的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞含有权利要求6所述的载体，或其基因组中整合有权利要求4所述的多核苷酸。

8.一种产生权利要求1所述细胞色素P450的突变蛋白的方法，其特征在于，包括步骤：

在适合表达的条件下，培养权利要求7所述的宿主细胞，从而表达出细胞色素P450的突变蛋白；和

分离所述细胞色素P450的突变蛋白。

9.一种酶制剂，其特征在于，所述酶制剂包含权利要求1所述的细胞色素P450的突变蛋白。

10.一种制备原人参二醇的方法，其特征在于，包括步骤：

(i)将权利要求1所述的细胞色素P450的突变蛋白与反应底物接触，进行催化反应，从而获得所述原人参二醇；和

(ii)任选地，分离并纯化所述原人参二醇。

11.一种权利要求1所述的突变蛋白的用途，其特征在于，所述的突变蛋白用于催化达玛烯二醇生成原人参二醇，或被用于制备催化达玛烯二醇生成原人参二醇的催化制剂。

12.一种权利要求1所述的突变蛋白或权利要求7所述的宿主细胞的用途，其特征在于，用于制备原人参二醇。

13.一种产生转基因植物的方法，其特征在于，包括步骤：将权利要求6所述的载体或权利要求4所述的核苷酸整合到宿主细胞中，再生为植物。

14.一种表达盒，其特征在于，所述的表达盒含有启动子，以及与所述启动子操作性相连的权利要求4所述的多核苷酸，所述的启动子的序列为SEQ ID NO.10-13中任一所示的序列。