[发明专利]基于高通量测序检测大前庭导水管综合征致病基因的多重PCR特异性引物、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201710058614.9 | 申请日： | 2017-01-23 |
| 公开（公告）号： | CN106591480A | 公开（公告）日： | 2017-04-26 |
| 发明（设计）人： | 冯永;梅凌云;刘亚兰;贺楚峰;朱奇;朱瑞娟;关媛妹;刘丽 | 申请（专利权）人： | 中南大学湘雅医院;广州奇辉生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州番禺容大专利代理事务所(普通合伙)44326 | 代理人： | 刘新年 |
| 地址： | 410008*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 通量 检测 前庭 水管 综合征 致病 基因 多重 pcr 特异性 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种基于高通量测序检测大前庭导水管综合征致病基因的多重PCR特异性引物，其特征在于，所述多重PCR特异性引物包括43对特异性引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：86所示。
2.根据权利要求1所述的特异性引物，其特征在于，所述引物为经过修饰的引物。
3.根据权利要求2所述的特异性引物，其特征在于，所述特异性引物的修饰方法为硫代修饰、脱氧尿嘧啶修饰、5’反向dT修饰中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的特异性引物，其特征在于，所述特异性引物的Tm值为58-62℃。
5.根据权利要求1-4任一项所述的特异性引物，其特征在于，所述引物应用于大前庭导水管综合征致病基因检测。
6.一种基于高通量测序检测大前庭导水管综合征致病基因的试剂盒，其特征在于，包括上述权利要求1-4任一项所述的特异性引物中的至少两对。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括通用引物、酶混合物、质控品、无核酸酶水。
8.一种基于高通量测序检测大前庭导水管综合征致病基因的方法，包括以下步骤：
S1：使用磁珠法对样本进行核酸提取，然后进行浓度及纯度的测定，测定合格后进行定量稀释，备用；
S2：用权利要求1-4任一所述的特异性引物或权利要求6或7所述的试剂盒对S1中所提取的核酸的目标区域进行一次PCR扩增，收集扩增产物备用；
S3：使用磁珠法对S2中扩增产物进行核酸纯化，并进行浓度及纯度的测定，混样，定量，上机测序。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述PCR反应体系为：
10.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述PCR反应程序为：
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