[发明专利]镰刀菌病病原菌RT-PCR检测引物和探针组合及试剂盒

权利要求书

1.含有镰刀菌病病原菌RT-PCR检测引物和探针组合的用于实时荧光定量PCR检测镰刀菌病病原菌的试剂盒，其特征在于，所述镰刀菌病病原菌RT-PCR检测引物和探针组合包括：

(I)用于检测镰刀菌的通用引物和探针，所述镰刀菌包括茄病镰刀菌、串珠镰刀菌和尖孢镰刀菌

Fpan-F：5′-GCCCGAGTTGTAATTTGTAGAG-3′

Fpan-R：5′-AACCAGACGGGGCTCTCAC-3′

Fpan-P：5′-FAM-GGTGCCTTCCGAGTTCCCTGG-BHQ1-3′

(II)用于检测串珠镰刀菌的特异性引物和探针

Fmon-F：5′-CGCATGAGTGTTTACTTCAACG-3′

Fmon-R：5′-AGGTCGACGAGGACGGCT-3′

Fmon-P：5′-FAM-AGCAGTCAA[T]G[T]CAAGAGTTCA-BHQ1-3′；

其中，[T]表示锁核酸；

(III)用于检测茄病镰刀菌的特异性引物和探针

Fsol-F：5′-GCATGAGCGTCTACTTCAAC-3′

Fsol-R：5′-AAGGGACCAGCACGAACG-3′

Fsol-P：5′-FAM-AGCTGACATCTGTAGGCTTCTGGTAA-BHQ1-3′；以及

(IV)用于检测尖孢镰刀菌的特异性引物和探针

Foxy-F：5′-TGTCTACTTCAACGAGGTATGC-3′

Foxy-R：5′-CATGGTACCAGGCTCAAGAT-3′

Foxy-P：5′-FAM-AATTCCCAAGCTCACACAACTAGG-BHQ1-3′；

所述试剂盒还包括竞争性内参模板Fpan-IAC、Fmon-IAC、Fsol-IAC、Foxy-IAC和内参探针Fu-IACP，其序列信息如下：

Fpan-IAC：5′-GCCCGAGTTGTAATTTGTAGAGCTAGATGACTGAGCACGTCTATCCGATGATCATGGTGAGAGCCCCGTCTGGTT-3′

Fmon-IAC：5′-CGCATGAGTGTTTACTTCAACGCTAGATGACTGAGCACGTCTATCCGATGATCATGAGCCGTCCTCGTCGACCT-3′

Fsol-IAC：5′-GCATGAGCGTCTACTTCAACCTAGATGACTGAGCACGTCTATCCGATGATCATGCGTTCGTGCTGGTCCCTT-3′

Foxy-IAC：5′-TGTCTACTTCAACGAGGTATGCCTAGATGACTGAGCACGTCTATCCGATGATCATGATCTTGAGCCTGGTACCATG-3′

Fu-IACP：5′-TAMRA-ACTGAGCACGTCTATCCGA-BHQ1-3′；

所述试剂盒还包括真菌DNA提取液和/或玻璃珠；

所述真菌DNA提取液的配方如下：

所述玻璃珠为直径710-1180μm的酸洗玻璃珠。

2.用于非疾病诊断目的检测镰刀菌病病菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测样品的DNA；

2)以上述提取的DNA为模板，利用权利要求1所述试剂盒，分别进行实时荧光定量PCR扩增；

3)分析PCR扩增产物。