[发明专利]一种肌肉干细胞的体外高效培养方法在审
| 申请号： | 201710062181.4 | 申请日： | 2017-02-01 |
| 公开（公告）号： | CN106854641A | 公开（公告）日： | 2017-06-16 |
| 发明（设计）人： | 沈露露;徐杰 | 申请（专利权）人： | 徐州细力再生医学科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 221000 江苏省徐州市泉山区淮*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 肌肉 干细胞 体外 高效 培养 方法 | ||
1.一种肌肉干细胞的体外高效培养方法，其特征在于包括下列步骤:（1）将离体并剪碎的小鼠肢体骨骼肌加入组织消化液，在37°C孵育2小时, 1000rpm离心5min，去上清，得经消化解离的组织和细胞；（2）经消化的组织按体积比1:10加入血清以终止酶消化；1000rpm离心5min,去上清；（3）经消化的组织置于胶原蛋白包被的培养皿中，并加肌肉干细胞培养基，在37℃，5%C02的培养箱中培养；（4）当肌肉干细胞生长到70-80%丰度时，收获细胞，用于细胞传代或下游应用。
2.如权利要求1所述的一种肌肉干细胞的体外高效培养方法，其特征在于所述组织消化液由0.2%I型胶原酶，肌肉干细胞培养基由DMEM，20%FBS, 1%青霉素和链霉素，1% 鸡胚提取物组成。
3.如权利要求1或2所述的一种肌肉干细胞的体外高效培养方法，其特征在于所述组织消化液的配制方法包括以下步骤：（1）称量0.1克I型胶原酶；（2）充分溶解于50毫升无血清DMEM培养基中；（3）使用无菌滤膜过滤；（4）滤液保存在4°C。
4.如权利要求1所述的一种肌肉干细胞的体外高效培养方法，其特征在于所述胶原蛋白包被液含 5 mg/ml的I型鼠尾胶原蛋白。
5.如权利要求1所述的一种肌肉干细胞的体外高效培养方法，其特征在于所述原代肌肉干细胞培养基的配制方法包括以下步骤：在385 ml DMEM中加入100 ml FBS, 5 ml 青霉素和链霉素，10 ml 鸡胚提取物组成，混匀，无菌滤膜过滤，滤液保存在4°C。
6.如权利要求4所述的一种肌肉干细胞的体外高效培养方法，其特征在于所述I型胶原酶余量为无血清DMEM培养基，pH=7.5-7.8。
7.如权利要求1-6任一所述的一种肌肉干细胞的体外高效培养方法，其特征在于适用于从正常野生型小鼠、基因敲除小鼠和转基因小鼠中分离和分化肌肉干细胞。
8.如权利要求7所述的一种肌肉干细胞的体外高效培养方法，其特征在于所使用的小鼠为成年的8-12周小鼠。
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