[发明专利]一种鸭源性成分的LAMP引物组及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测鸭源性成分的LAMP引物组，其包括外引物F3和B3，内引物FIP和BIP，从5’端到3’端，具体序列如下：

F3：AAGGTGACCGCTTTCAAGG；

B3：TTCCCCCTCACCCCTATG；

FIP：CTGCGCTGCCATACTGCTCA-AAAGCCAGTGCGTTGCTG；

BIP：AGCTCTGTGACGAATCTGGCAG-GACCATCCCGAACCTCCT。

2.根据权利要求1所述的用于检测鸭源性成分的LAMP引物组，还包括两条环化引物，从5’端到3’端，具体序列为：

LF：CTCACTGCTCCTCTCTGCA；

LB：GCATTTCTGGAATCTGCA。

3.如权利要求1所述用于检测鸭源性成分的LAMP引物组在制备检测鸭源性成分的LAMP检测试剂盒中的应用。

4.一种包含权利要求1所述LAMP引物组的鸭源性成分的LAMP检测试剂盒。

5.根据权利要求3所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述LAMP检测试剂盒包含LAMP反应体系，该LAMP反应体系包括：内引物FIP、内引物BIP、外引物F3、外引物B3、MgSO₄、dNTPs、Bst DNA聚合酶和甜菜碱，其中，内引物与外引物的浓度之比为1～8：1。

6.根据权利要求4所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述的LAMP反应体系中，各成分的终浓度为：内引物FIP 0.2～1.6μmol/μL，内引物BIP 0.2～1.6μmol/μL，外引物F3 0.2～0.8μmol/μL，外引物B30.2～0.8μmol/μL，MgSO₄ 2.5～10mmol/μL，dNTPs 0.25～2.25mmol/μL，Bst DNA聚合酶0.08～0.48U/μL，甜菜碱0.05～0.25μmol/μL，其中，内引物与外引物的浓度比为1～8：1。

7.根据权利要求4所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述LAMP反应体系的总体积为25μL，各成分的终浓度为：内引物FIP 0.8～1.0μmol/μL，内引物BIP 0.8～1.0μmol/μL，外引物F3 0.2μmol/μL，外引物B3 0.2μmol/μL，MgSO₄ 4mmol/μL，dNTPs 1.75mmol/μL，BstDNA聚合酶0.4U/μL，甜菜碱0.25μmol/μL，余量为水，内引物与外引物的浓度比为4～5：1。

8.一种鸭源性成分的LAMP快速检测方法，包括以下步骤：

1)提取待测样品DNA；

2)配制LAMP反应体系

所述LAMP反应体系中：待测样品DNA 0.013～25ng/μL，MgSO₄2.5～10mmol/μL，dNTPs0.25～2.25mmol/μL，Bst DNA聚合酶0.08～0.48U/μL，甜菜碱0.05～0.25mol/μL，权利要求1所述内引物FIP0.2～1.6μmol/μL，内引物BIP 0.2～1.6μmol/μL，外引物F30.2～0.8μmol/μL，外引物B3 0.2～0.8μmol/μL，其中，内引物与外引物的浓度之比为1～8：1；

3)进行LAMP扩增反应

LAMP扩增反应温度为58～65℃，反应时间为20～80min；

4)鉴定扩增结果

步骤3)LAMP扩增反应结束后，向扩增产物中加入SYBR GreenI染料，观察颜色变化：显色绿色的样品为阳性，含有鸭源性成分；显色橘色的样品为阴性，不含鸭源性成分。