[发明专利]一种鸭源性成分的LAMP引物组及检测方法

说明书

一种鸭源性成分的LAMP引物组及检测方法，该LAMP引物组包括外引物F3和B3，内引物FIP和BIP，本发明的LAMP引物序列组所针对的基因片段用于检测鸭源性成分时，与其它物种，如牛、猪、鸡、羊，均无交叉，特异性高，本发明的鸭源性成分的LAMP快速检测方法，简便快捷，反应时间短，对仪器设备要求低，可通过肉眼观察来判断结果，特异性高，灵敏度高，实现现场检测结果的可视化，适合现场快速诊断。

技术领域

本发明涉及肉产品的检测领域，具体涉及一种鸭源性成分的LAMP引物组及检测方法。

背景技术

食品安全关系到老百姓的身体健康和生命安全，关系到社会的稳定。肉制品是日常生活中主要的动物蛋白来源，包括：鲜肉(分割肉、肉卷)，腌制肉(咸肉，香肠，火腿等)，另外还有酱卤肉，培根，肉干，肉脯，肉丸，调理肉串等。

由于肉制品无法具备动物整体形态的特异性，一旦经过加工工艺的处理，消费者更是难以辨认真假。面对目前牛羊肉市场存在的混乱现象，根据肉的色泽，气味，纹理，肥瘦等方面进行鉴别的传统方法已不能满足职能部门监管的需求。

为了确定畜肉食品的真实性，已建立了很多动物源性成分鉴别的方法，包括物理，化学，免疫学和分子生物学等方法，目前，在肉产品的成分检测中使用的有PCR方法，光谱法和质谱法等。其中，尤以分子生物学方法中聚合酶链式反应(polymerasechain reaction，PCR)最为快速且灵敏。

史艳宇等建立肉食品中鸭源性成分PCR快速检测方法，灵敏度可以达到0.1μg/kg(聚合酶链式反应快速检测畜肉食品中鸭源性成分，食品科学，2014，35)；尚柯等在PCR基础上，将多重PCR法引入到畜肉源性鉴定的研究中(多重PCR法用于畜肉源性鉴定的研究，食品工业科技，2013，34)；冯海永等成功运用PCR-RFLP分析方法鉴别羊肉和鸭肉(利用线粒体DNA Cyt b基因PCR-RFLP分析方法鉴别羊肉和鸭肉，食品工业科技，2012，33)，但是，这些PCR检测方法，必须依赖实验室仪器，难以脱离实验室去进行现场检测。

目前应用最多的是荧光定量PCR技术，尽管检测灵敏度较高，如刘岑杰等以鸭线粒体DNA序列为目的基因，建立鸭源性成分检测方法，灵敏度为0.01％(肉制品中鸭源性成分的实时荧光PCR检测，肉类工业，2015，405)。张驰等根据细胞色素b基因设计鸭特异性引物和TaqMan探针，检测灵敏度达到1.78pg(荧光定量PCR检测肉制品中鸭源性成分，食品科学，2013，34)；李莹莹等用蛋白组学的方法研究了5种常见的食用肉中相对种属特征性多肽，利用液相色谱、质谱联用对羊肉与鸭肉混合物种特征性的多肽进行了验证与定量研究，检出限可以达到0.5％(液相色谱-串联质谱法对羊肉中鸭肉掺假的鉴别，食品科学，2016，37)，然而，这些检测方法也必须依赖实验室仪器，难以脱离实验室实现现场检测。

无论是PCR方法，还是光谱法和质谱法，都离不开实验仪器，需要在实验室里完成检测，实验步骤多，所需时间长，成本高，在肉产品质量监管过程中，非常需要建立一种快速检测技术实现现场检测。

等温扩增技术(Isothermal Amplification Technology)是PCR技术的衍生技术，其反应过程始终维持在恒定的温度下，通过添加不同活性的酶和各自特异性引物来达到快速核酸扩增的目的，环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是其中的一种，应用于各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中，但是，现有鸭源性LAMP检测方法实验步骤多，所需时间长，成本高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鸭源性成分的LAMP引物组及检测方法，用于检测鸭源性成分，特异性高，灵敏度高，反应时间短，对仪器设备要求低，不需要PCR仪等实验室仪器，通过肉眼观察来判断结果，简便快捷，实现现场检测结果的可视化，非常适合现场快速诊断。