[发明专利]一种用于生发的注射液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种注射液及其制备方法，具体涉及一种用于生发的注射液及其制备方法，属于生物医药技术领域。

背景技术

当前，毛发缺损的发病率较高，包括自然的雄激素性毛发脱失、烧伤性毛发缺损、创伤性毛发缺失、医源性毛发缺失等。

毛发缺损的修复方法很多，如头皮扩张、头皮缩减、头皮条游离移植、皮瓣法、自体毛发移植法。

自体毛发移植可以分为好多种方法，如环钻钻孔移植、激光打孔移植、狭缝移植等，移植物的形状包括圆柱形、方形、片状、椭圆形等，每个移植物含有的毛发数目4-12根不等。

上述的修复方法都可以修复毛发缺失，但是都存在这样一个问题：

毛发移植物较大，因而产生术后毛发方向和密度分布不自然、受区损伤大、存活率低、影响美观等缺点。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种用于生发的注射液及其制备方法。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

一种用于生发的注射液，其特征在于，由毛囊干细胞、毛乳头细胞、适量赋形剂和水组成，其中，每100ul注射液中含有1×10⁶以上个毛囊干细胞和1×10⁶以上个毛乳头细胞。

前述的用于生发的注射液，其特征在于，前述赋形剂选自胶原、纤维蛋白原、热逆变水凝胶、原位交联的水凝胶、化学交联的可生物吸收的聚合物、凝血酶、淀粉、透明质酸、明胶、硫酸软骨素、多糖、蛋白质、以及上述的任何衍生物共聚物或其它变体及其它药学上可接受的赋形剂。

前述的用于生发的注射液，其特征在于，前述赋形剂选自胶原和硫酸软骨素。

前述的用于生发的注射液，其特征在于，前述胶原为IV型胶原。

前述的用于生发的注射液，其特征在于，制备方法为：

一、分离毛乳头细胞和毛囊干细胞

取美容手术中多余的正常的头皮组织，用含抗生素的PBS反复冲洗，用剪刀去除头皮组织的皮下脂肪，并将毛乳头剪下放入预先铺有IV型胶原的培养皿中，将头皮组织剪成宽2-3mm的条状，将剪好的头皮组织浸泡在0.25％的中性蛋白酶中，4℃过夜，次日取出，然后用PBS冲洗，再用摄子小心将毛发从头皮组织中拔出，置于预先铺有IV型胶原、盛有DMEM但是未添加FBS的培养皿中；

二、培养毛乳头细胞

向放有毛乳头的培养皿中加入5ml 0.2％II型胶原酶，在37℃孵箱内消化1h，并不时摇动，观察到液体变浑浊、真皮鞘变软后取出，用吸管反复吹打使毛乳头游离，加入PBS进行离心，先以2000rmp离心5min，反复4遍，再以800rmp离心4min，反复3遍，离心完成后弃上清，取沉淀，向沉淀中加入含10％FBS的DMEM培养基，重悬，接种到培养瓶中，放于37℃恒温培养箱中培养，每三天换液一次，当细胞融合达到90％后，吸取培养基，再用无菌PBS清洗两遍，胰酶消化2min，完全培养基中和终止消化，离心后弃上清，将沉淀物加入到含10％FBS的DMEM培养基中，以1：3比例传代培养，培养至第5代，得到毛乳头细胞培养物；

三、培养毛囊干细胞

在解剖显微镜下去除毛囊上段与下段，收集毛囊中段，在37℃条件下用胰蛋白酶消化毛囊中段30-45min，消化结束后用10％FBS培养基中和，再400目筛网过滤，将滤液离心，弃上清，将沉淀物加入到K-SFM无血清培养基中，以5×10⁴/cm²的密度将细胞接种在预铺有IV型胶原并且盛有DMEM但是未添加FBS的培养皿中，30min后弃上清及未贴壁的细胞，用PBS小心冲洗，重新加入到K-SFM无血清培养基中，然后放于37℃恒温培养箱中培养，每三天换液一次，当细胞融合达到90％后，吸取培养基，用无菌PBS清洗两遍，胰酶消化2min，完全培养基中和终止消化，离心后弃上清，将沉淀物加入到K-SFM无血清培养基中，以1：3比例传代培养，培养至第5代，得到毛囊干细胞培养物；

四、制成注射液

将培养至第5代的毛囊干细胞和毛乳头细胞转移至离心管中，1000rpm离心5min，弃上清，将沉淀物用完全培养基重悬，并用细胞计数板计数，将毛囊干细胞和毛乳头细胞转移至另一离心管中，1000rpm离心5min，弃上清，向沉淀物中加入适量体积的悬液，使100ul注射液中含有1×10⁶以上个毛囊干细胞和1×10⁶以上个毛乳头细胞，前述悬液是赋形剂的水溶液。