[发明专利]一种用于鉴定米象和玉米象的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种用于鉴定米象和玉米象的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下两对引物：引物对1由序列1和序列2两条单链脱氧核糖核酸组成，序列1：5’-TTGATTACTTCCACCCTCC-3’，序列2：5’-AAGTATAGTGATTGCTCCT-3’；引物对2由序列3和序列4两条单链脱氧核糖核酸组成,序列3：5’-TTATTAGTTACGAAAGAGGA-3’序列4：5’-ATCAAAGGGATGTAGGAGAA-3’；所述序列1由19个核苷酸组成，序列2由19个核苷酸组成，序列3由20个核苷酸组成；序列4由20个核苷酸组成，所述试剂盒还包括聚合酶链式反应缓冲液、脱氧核糖核酸聚合酶和4种脱氧核糖核苷三磷酸，所述引物对1和引物对2中的两条单链脱氧核糖核酸的摩尔数相等，所述引物对1特异于米象，引物对2特异于玉米象。

2.一种如权利要求1所述的试剂盒应用于鉴定米象和玉米象的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)提取米象或玉米象的基因组脱氧核糖核酸，将提取的脱氧核糖核酸置于-20℃下，备用；

(2)以步骤(1)中备用的脱氧核糖核酸为模板，分别对引物对1和引物对2进行聚合酶链式反应，即可得到相应的聚合酶链式反应产物；

(3)将步骤(2)中的聚合酶链式反应产物分别进行琼脂糖凝胶电泳检测，溴化乙锭染色后，在凝胶成像系统中观察并成像分析。

3.根据权利要求2所述的一种鉴定米象和玉米象的方法，其特征在于：聚合酶链式反应体系由2.5μL的浓度为2.5mmol/L的脱氧核糖核苷三磷酸，0.2μL的浓度为2.5U/μL的脱氧核糖核酸聚合酶，1μL的基因组脱氧核糖核酸，16.8μL的双蒸水，1μL的浓度为10μmol/L的引物对，2.5μL含镁离子的缓冲液组成。

4.根据权利要求2所述的一种鉴定米象和玉米象的方法，其特征在于：聚合酶链式反应条件为：95℃预变性5min，95℃变性30s；引物对1在60℃的条件下退火30s，引物对2在58℃的条件下退火30s；72℃延伸1min；将此过程进行35个循环。