[发明专利]鲤疱疹病毒3型1301株ORF136基因重组表达蛋白、抗体及其应用

权利要求书

1.一种鲤疱疹病毒3型1301株ORF136基因重组表达蛋白，其特征在于，其全长氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.一种编码权利要求1所述的重组表达蛋白的核苷酸，其特征在于，其全长核苷酸碱基序列如SEQ ID NO:1所示。

3.一种多克隆抗体，其特征在于，以氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的重组表达蛋白为抗原在免疫动物中制备所得。

4.权利要求3所述的抗体制备用于检测锂疱疹病毒3型的免疫工具的应用。

5.权利要求3所述的抗体在检测、预防或治疗鲤疱疹病毒3型感染引起的相关疾病中的应用。

6.一种制备权利要求3所述的多克隆抗体的方法，其特征在于，具体制备步骤如下：

1)扩增：以鲤疱疹病毒3型1301株DNA为模板，设计特异性引物对ORF136基因编码蛋白第31～157位氨基酸区域进行PCR扩增，得到重组克隆载体pMD18-T-ORF136；

2)构建：将重组克隆载体pMD18-T-ORF136、原核表达载体pET-32a(+)分别进行双酶切后连接，构建重组原核表达载体pET-32a-ORF136；

3)表达：将pET-32a-ORF136转化至大肠杆菌Rosetta经IPTG诱导表达后得到如SEQ ID NO:5所示的重组表达蛋白；

4)制备：将如SEQ ID NO:5所示的重组表达蛋白在免疫动物中免疫后进行采血；对血液进行处理后得到多克隆抗体。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，

所述步骤2)中酶切的体系为：10×buffer 2ul，EcoR I和Xho I各1ul，质粒1ug，补ddH₂O水至20ul；37℃水浴酶切2h；

所述步骤2)中连接的体系为：T4Ligase 1.5uL，10×T4Ligase buffer 1.5uL，pET-32a(+)3uL，酶切后的片段9uL；16℃连接过夜。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中pET32a-ORF136转化至大肠杆菌Rosetta中，筛选阳性克隆，接种于含有氨苄的LB培养基中，培养至OD600为0.4，加入IPTG进行表达诱导后，离心收集菌体，将菌体进行清洗、破碎、离心后收集包涵体蛋白，包涵体蛋白纯化后得到重组表达蛋白。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤4)中重组表达蛋白在免疫动物中进行皮下多点注射免疫，免疫后进行采血；将血液静置后，离心，收集血清，用亲和纯化的方式对抗血清进行纯化，得到多克隆抗体。