[发明专利]米槠组织培养的快速繁殖方法

权利要求书

1.一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过3-4个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，具体操作步骤如下：

（1）外植体选择：采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体；

（2）外植体处理：将外植体置于自来水下冲洗10-15 min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度 0.3%的氯化汞溶液中，控制浸泡时间15-20 min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5-3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；

（3）初始芽诱导培养：将步骤（2）得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，培养30-35 d，初始芽萌发、生长；

（4）增殖培养：将高≥1cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，35-40 d转接一次，循环往复，经3-4个周期的培养，形成丛生芽；

（5）壮芽培养：将步骤（4）得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽/丛，插入壮芽培养基中，培养35-40 d，形成壮芽；

（6）生根培养：将步骤（5）得到的高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根；余下小芽丛再次接种于步骤（4）的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤（5），循环往复，获得大量壮芽。

2.根据权利要求1所述的一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：所述的初始芽诱导培养基的配方为：1/2改良MS培养基+6-BA 4.0-6.0 mg/L+IAA 2.0-3.0 mg/L+KT 1.0-2.0 mg/L+ZT 1.5-2.0 mg/L+ VC 15 mg/L+叶酸10mg/L+VB₂ 15 mg/+琼脂3.0 g/L+卡拉胶25 g/L。

3.根据权利要求1所述的一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：所述的增殖培养基的配方为：1/2改良MS培养基+6-BA 6.0-8.0 mg/L+IAA 2.0-3.0 mg/L+ZT 0.5-1.0 mg/L+VC 15 mg/L+VB₂ 15 mg+L-半胱氨酸 20 mg/L+琼脂 3.6 g/L+卡拉胶 30 g/L。

4.根据权利要求1所述的一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：所述的壮芽培养基的配方为：改良MS培养基+6-BA 3.0-4.0 mg/L+IAA 1.0-1.5 mg/L+VC 15 mg/L+VB₂ 15 mg+L-半胱氨酸 20 mg/L+琼脂 3.5 g/L+卡拉胶 25 g/L。

5.根据权利要求1所述的一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：所述的生根培养基的配方为：1/2改良MS培养基+6-BA 1.5-2.5 mg/L+IAA 1.0-1.5 mg/L+琼脂 3.5 g/L+卡拉胶 30 g/L。