[发明专利]米槠组织培养的快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于植物繁殖技术领域，涉及一种米槠组织培养的快速繁殖方法。

背景技术

米槠（Castanopsis carlesii （Hemsl.）Hay.），壳斗科锥属，乔木，高可达20米，芽小，叶披针形，叶全缘，或兼有少数浅裂齿，嫩叶叶背有红褐色或棕黄色稍紧贴的细片状蜡鳞层，成长叶呈银灰色或多少带灰白色；雄圆锥花序近顶生，花序轴无毛或近无毛，果序无毛，壳斗近圆球形或阔卵形，坚果近圆球形或阔圆锥形，熟透时无毛，果脐位于坚果底部。3-6月开花，次年9-11月结果成熟。产中国长江以南各地。生于山地或丘陵常绿或落叶阔叶混交林中。喜雨量充沛和温暖气候，能耐荫，喜深厚、温润之中性和酸性土，亦耐干旱和贫瘠。既是优良的用材树种，又是培育食用菌的优良原料，培肥土壤、涵养水源能力都比较强。米槠树形高大、美观，叶椭圆或长圆形。早期生长迅速，适应能力强，抗风力强，又耐烟尘、抗污染并能杀菌。在庭院观赏及营造防火林带中有着广阔的应用前景和发展潜力。组织培养能通过无性繁殖，遗传树种的优良特性，能在短时间内快速繁殖获得大量优质的组培苗，为优质种源推广提供可能。

发明内容

本发明的目的是针对米槠组织培养过程中芽增殖系数低，生长缓慢等问题,提供一种生长效果好、扩繁快的米槠嫩枝组培繁殖方法。

为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：

一种米槠组织培养的快速繁殖方法，包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过3-4个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，具体操作步骤如下：

（1）外植体选择：采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体；

（2）外植体处理：将外植体置于自来水下冲洗10-15 min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度 0.3%的氯化汞溶液中，控制浸泡时间15-20 min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5-3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；

（3）初始芽诱导培养：将步骤（2）得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，培养30-35 d，初始芽萌发、生长；

（4）增殖培养：将高≥1cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，35-40 d转接一次，循环往复，经3-4个周期的培养，形成丛生芽；

（5）壮芽培养：将步骤（4）得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽/丛，插入壮芽培养基中，培养35-40 d，形成壮芽；

（6）生根培养：将步骤（5）得到的高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根；余下小芽丛再次接种于步骤（4）的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤（5），循环往复，获得大量壮芽。

以上所述的初始芽诱导培养基的配方为：1/2改良MS培养基+6-BA 4.0-6.0 mg/L+IAA 2.0-3.0 mg/L+KT 1.0-2.0 mg/L+ZT 1.5-2.0 mg/L+ VC 15 mg/L+叶酸10mg/L+VB₂ 15 mg/+琼脂3.0 g/L+卡拉胶25 g/L。

以上所述的增殖培养基的配方为：改良1/2MS培养基+6-BA 6.0-8.0 mg/L+IAA 2.0-3.0 mg/L+ZT 0.5-1.0 mg/L+VC 15 mg/L+VB₂ 15 mg+L-半胱氨酸 20 mg/L+琼脂 3.6 g/L+卡拉胶 30 g/L。

以上所述的壮芽培养基的配方为：改良MS培养基+6-BA 3.0-4.0 mg/L+IAA 1.0-1.5 mg/L+VC 15 mg/L+VB₂ 15 mg+L-半胱氨酸 20 mg/L+琼脂 3.5 g/L+卡拉胶 25 g/L。

以上所述的生根培养基的配方为：1/2改良MS培养基+6-BA 1.5-2.5 mg/L+IAA 1.0-1.5 mg/L+琼脂 3.5 g/L+卡拉胶 30 g/L。