[发明专利]提高苜蓿根瘤菌剂有效期的方法

权利要求书

1.提高苜蓿根瘤菌剂有效期的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

一、将冷冻保存的苜蓿根瘤菌移接到斜面培养基中，在恒温培养箱中于37±1℃培养22～26h，得到活化的菌种；所述斜面培养基为YMA固体培养基；

二、取一环已活化的菌种，接入到三角瓶的种子培养基中，于37±1℃，180～200rpm/min培养36～40h，得到种子液；所述种子培养基为YMA液体培养基；

三、将种子液以2％的接种量接入YMA培养基中，在摇床中于37±1℃下振荡培养36～40h，摇床转速为180～200rpm/min，调节初始pH值到7.2～7.3，得到种子培养液，六层纱布封口；

四、将种子培养液接种到500L发酵罐中，进行流加发酵培养，发酵罐的装料系数为0.75，当发酵进行到0—10h，通气比为1:0.8；10—20h，通气比为1:1.2；20h时发酵结束，通气比为1:1；总发酵时间36～40h，得到发酵液；

五、将发酵液用蒸馏水稀释至有效活菌数达到4亿/mL，将稀释后的发酵液与Premax保护剂按体积比1:1混合，即得到苜蓿根瘤菌剂。

2.根据权利要求1所述的提高苜蓿根瘤菌剂有效期的方法，其特征在于步骤一中在恒温培养箱中于37℃培养24h。

3.根据权利要求1所述的提高苜蓿根瘤菌剂有效期的方法，其特征在于步骤二中于37℃，180rpm/min培养38h。

4.根据权利要求1所述的提高苜蓿根瘤菌剂有效期的方法，其特征在于步骤二中三角瓶体积为500mL，培养基装量为100mL。

5.根据权利要求1所述的提高苜蓿根瘤菌剂有效期的方法，其特征在于步骤三中在摇床中于37℃下振荡培养38h。

6.根据权利要求1所述的提高苜蓿根瘤菌剂有效期的方法，其特征在于步骤四中流加发酵所用培养基为YMA培养基。

7.根据权利要求1所述的提高苜蓿根瘤菌剂有效期的方法，其特征在于步骤四中将种子培养液接种到发酵罐的接种量为0.5％～0.8％。

8.根据权利要求1所述的提高苜蓿根瘤菌剂有效期的方法，其特征在于步骤四中将种子培养液接种到发酵罐的接种量为0.6％～0.7％。