[发明专利]提高苜蓿根瘤菌剂有效期的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种苜蓿根瘤菌剂的制备方法。

背景技术

苜蓿根瘤菌剂在生产应用中能显著增加苜蓿的根瘤数量，增加苜蓿自身固氮能力，减少氮肥投入，提高苜蓿产量和品质，更加有效地保护环境。

但是现有的苜蓿根瘤菌剂在实际应用中存在不适于长期保存，有效期短，液体剂型有效期三个月，颗粒剂型有效期六个月。过期使用就会大大降低苜蓿结瘤数量，降低生物固氮量，尤其增加生产企业的生产风险，一旦产品积压将意味着巨大的经济损失。

发明内容

本发明是要解决现有的苜蓿根瘤菌剂有效期短，有效活菌数少的问题，提供一种提高苜蓿根瘤菌剂有效期的方法。

本发明提高苜蓿根瘤菌剂有效期的方法，包括以下步骤：

一、将冷冻保存的苜蓿根瘤菌移接到斜面培养基中，在恒温培养箱中于37±1℃培养22～26h，得到活化的菌种；所述斜面培养基为YMA固体培养基；

二、取一环已活化的菌种，接入到三角瓶的种子培养基中，于37±1℃，180～200rpm/min培养36～40h，得到种子液；所述种子培养基为YMA液体培养基；

其中三角瓶体积为500mL，装量为100mL种子培养基；

三、将种子液以2％的接种量接入YMA培养基中，在摇床中于37±1℃下振荡培养36～40h，摇床转速为180～200rpm/min，调节初始pH值到7.2～7.3，得到种子培养液，六层纱布封口；

四、将种子培养液接种到500L发酵罐中，进行流加发酵培养，发酵罐的装料系数为0.75，当发酵进行到0—10h，通气比为1:0.8；10—20h，通气比为1:1.2；20h时发酵结束，通气比为1:1；总发酵时间36～40h，得到发酵液；

其中流加发酵所用培养基为YMA培养基；

五、将发酵液用蒸馏水稀释至有效活菌数达到4亿/mL，将稀释后的发酵液与Premax保护剂按体积比1:1混合，即得到苜蓿根瘤菌剂。

步骤一中所述苜蓿根瘤菌为苜蓿中华根瘤菌。

步骤四中将种子培养液接种到发酵罐的接种量为0.5％～0.8％。

所述Premax保护剂由阿根廷利索微生物技术有限公司生产，并在非专利文献《阿根廷利索公司大豆根瘤菌剂对大豆结瘤和产量的影响》中公开。

本发明的有益效果：

本发明将Premax保护剂添加到苜蓿根瘤菌中，大大延长了苜蓿根瘤菌剂的有效期。本发明方法制备的苜蓿根瘤菌剂其有效期在12个月以上，即使产品积压，第二年产品仍有足够的活菌数保证使用效果。

本发明方法能够增加苜蓿根瘤菌的有效活菌数，在实际生产中大大提高根瘤数，增加生物固氮能力，减少氮肥使用量。降低投入的情况下提高苜蓿产量，提高苜蓿品质，缓解增施化肥造成的土壤板结，尤其会降低生产厂家的风险，避免因为产品积压而造成经济损失的被动局面。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式提高苜蓿根瘤菌剂有效期的方法，包括以下步骤：

一、将冷冻保存的苜蓿根瘤菌移接到斜面培养基中，在恒温培养箱中于37±1℃培养22～26h，得到活化的菌种；所述斜面培养基为YMA固体培养基；

二、取一环已活化的菌种，接入到三角瓶的种子培养基中，于37±1℃，180～200rpm/min培养36～40h，得到种子液；所述种子培养基为YMA液体培养基；

三、将种子液以2％的接种量接入YMA培养基中，在摇床中于37±1℃下振荡培养36～40h，摇床转速为180～200rpm/min，调节初始pH值到7.2～7.3，得到种子培养液，六层纱布封口；

四、将种子培养液接种到500L发酵罐中，进行流加发酵培养，发酵罐的装料系数为0.75，当发酵进行到0—10h，通气比为1:0.8；10—20h，通气比为1:1.2；20h时发酵结束，通气比为1:1；总发酵时间36～40h，得到发酵液；

五、将发酵液用蒸馏水稀释至有效活菌数达到4亿/mL，将稀释后的发酵液与Premax保护剂按体积比1:1混合，即得到苜蓿根瘤菌剂。

其中步骤一中所述苜蓿根瘤菌为苜蓿中华根瘤菌。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤一中在恒温培养箱中于37℃培养24h。其它与具体实施方式一相同。