[发明专利]一种使用全悬浮技术生产猪伪狂犬病疫苗的方法

权利要求书

1.一种使用全悬浮技术生产猪伪狂犬病疫苗的方法，其特征在于其制备方法包括细胞培养、更换细胞培养液并接毒和收获工序，即先将ST细胞用摇瓶进行悬浮培养扩增后接入生物反应器进行悬浮培养，当细胞生长至病毒接种密度后更换一部分细胞培养液并接入病毒种子液，在生物反应器内继续培养至结束后收获病毒液，加入适宜的冻干保护剂混匀分装后经真空冻干而成。

2.如权利要求1所述一种使用全悬浮技术生产猪伪狂犬病疫苗的方法，其特征在于所述更换细胞培养液并接毒工序为使用ST细胞在生物反应器中悬浮培养至可接毒状态时，将细胞培养液的1/3换成新的细胞培养液，并接种猪伪狂犬病病毒。

3.如权利要求1所述一种使用全悬浮技术生产伪狂犬病病毒的方法，其特征在于所述方法具体为：

(1)将ST细胞用摇瓶悬浮培养48h～72h后离心，用细胞培养液将经离心的细胞重悬后以密度3×10⁵～3×10⁶/ml接入生物反应器，进行ST细胞全悬浮培养；

(2)待ST细胞全悬浮培养至密度为6×10⁵/ml～6×10⁶/ml，生物反应器15℃沉降2小时，泵出上层1/3的原培养液注入新的细胞培养液，并按照体积比1％～5％接种伪狂犬病病毒种毒；

(3)在生物反应器中继续培养悬浮细胞，待80％左右的细胞出现典型CPE时，收获病毒液，加入适宜的冻干保护剂混匀后分装、经冷冻真空干燥制成疫苗。

4.如权利要求1-3所述一种使用全悬浮技术生产伪狂犬病疫苗的方法，其特征在于所述的病毒为保藏号为CGMCC No.11912的伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus)HZ株。

5.如权利要求1所述一种使用全悬浮技术生产猪伪狂犬病的方法，其特征在于所述ST细胞株，是由猪睾丸传代细胞系(ST细胞系)经贴壁培养阶段的低血清驯化过程和低血清培养液悬浮驯化过程而获得，该株细胞被命名为猪睾丸细胞系(Porcine testis)悬浮适应株，简称ST-1株。该株细胞已于2016年08月23日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.12698。