[发明专利]一种血红蛋白的检测方法及血红蛋白检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术分析检测领域，尤其是一种血红蛋白的检测方法及血红蛋白检测试剂盒。

背景技术

现阶段，血红蛋白的检测方法包括：硫酸铜滴定法进行血红蛋白测定，或者采用进口大型生化分析仪进行测定。前者存在自行配制误差大、易受环境温度影响等缺点,后者仪器价格昂贵,测试成本高。国外常用的测试方法为试剂盒和干式生化分析法,试剂盒法需要大型生化分析仪,干式生化分析法产品主要有德国的Re-flotronⅣ型全血干式生化分析仪和瑞典的SWELAB血液分析仪,采用的均是波长比色法,所需采血量较大,测试时间长,成本高。

免疫层析胶体金技术的优点是微创取样，取样量少，成本低，检测快，准确度高，适用于现场及家庭检测，而目前市场上未出现免疫层析技术检测血红蛋白含量的产品，其技术难点在于血红蛋白双抗体夹心存在HOOK效应，因此目前免疫层析双抗体技术还是主要集中在潜血，隐血的检测项目中。

Hook效应是指在双位点夹心免疫试验中，其剂量反应曲线的高剂量区段，线性走向不是呈平台状无限后延，而是向下弯曲状，此现象称之为HOOK效应。目前对于血红蛋白的免疫学检测，一般需要多步稀释才能使其处于线性范围内，但这样造成的误差势必会加大。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种血红蛋白的检测方法。

本发明所要解决的技术问题在于提供一种实现上述检测方法的血红蛋白检测试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种血红蛋白的检测方法，采用免疫夹心法进行检测，具体步骤如下：标记有胶体金颗粒的第一抗体结合血液中释放的血红蛋白后，借助毛细作用力向前层析，层析至硝酸纤维素膜包被的第二抗体(即固相载体)时，形成“胶体金颗粒-抗体-抗原-抗体”的复合体系，并且聚集于硝酸纤维素膜上，胶体金颗粒大量聚集时可形成紫红色的信号，通过仪器能够准确定量判读检测信号的强度，从而实现定量检测,所述第一抗体为抗人血红蛋白抗体，第二抗体为配对的血红蛋白抗体，所述第一抗体和第二抗体可同时结合于目标抗原的不同表位，从而形成复合体系。

在低剂量范围内，随着血红蛋白含量增多，检测信号增强，呈正相关性，当样本中血红蛋白超过一定量时，便不可避免的发生HOOK效应，即随着血红蛋白浓度的增加，检测信号递减，在一定范围呈负相关性。

一种实现上述检测方法的血红蛋白检测试剂盒，包括由血红蛋白检测试纸、外置卡壳、样本裂解液以及内设了相应标准曲线和判定方法的IC卡，其中，

所述血红蛋白检测试纸，宽度为3-5mm，长度为7-8cm，所述检测试纸由含有胶体金标记的抗人血红蛋白抗体的胶体金垫、包被有T线和C线(即包被有配对的血红蛋白抗体和抗鼠IgG)的硝酸纤维素膜(NC膜，为多孔结构膜，孔径为8-15um)、样品垫、吸样垫和塑料底板组成，所述T线为配对的血红蛋白抗体，C线为抗鼠IgG，所述抗人血红蛋白抗体作为第一抗体标记有胶体金颗粒，样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸样垫从塑料底板一端依次排列至另一端；

所述外置卡壳，包含上盖和下盖，两条所述血红蛋白检测试纸平行放置于所述下盖内部，所述上盖对应样品垫部分设置有样品孔，用于加入样本和 稀释液，上盖对应硝酸纤维素膜中部位置设置有视窗口，用于观察硝酸纤维素膜上的C线、T线，判定结果。

所述样本裂解液，主要配方为：0.02M Tris-HCL，0.15molNaCL，1％Triton100调节PH至7.4。

所述IC卡，内置了标准曲线和判定方法，标准曲线通过多次试验结果绘制得到,该IC卡配套使用NS3001B型免疫层析结果判读记录仪(天津中新科炬生物制药有限公司产品)使用，用于对检测结果的定量判定，具体来说,血红蛋白试纸判读测定得到信号值,利用IC卡将信号值与浓度值进行转换从而得到浓度值,对血红蛋白检测范围为50-250g/L。

优选的，上述血红蛋白检测试剂盒，所述吸样垫为吸水滤纸。

优选的，上述血红蛋白检测试剂盒，所述包被有配对抗体的硝酸纤维素膜的制备方法为：以0.01M pH 7.4磷酸盐缓冲液(PBS)将配对的血红蛋白抗体配制成终浓度1-2mg/mL，将喷膜仪在硝酸纤维素膜上以1.2-1.4ul/cm的参数进行划线，包被T线，同时在硝酸纤维素膜上部包被1-2mg/ml的抗鼠IgG，作为C线，干燥，备用。