[发明专利]一种改进的离心柱法外周血游离DNA提取试剂及其提取方法

权利要求书

1.一种改进的离心柱法外周血游离DNA提取试剂，其特征在于包含：0.2ug/uL～5ug/uL酵母tRNA，其余部分包含超纯水；并且所述DNA提取试剂的pH值为7.3～8.2。

2.根据权利要求1所述的改进的离心柱法外周血游离DNA提取试剂，其特征在于，所述改进的离心柱法外周血游离DNA提取试剂的pH值为7.5，溶剂为超纯水，溶质为如下终浓度物质：酵母tRNA 1ug/uL。

3.一种试剂盒，其特征在于包含权利要求1-2中任一项所述的改进的离心柱法外周血游离DNA提取试剂。

4.一种改进的离心柱法外周血游离DNA提取方法，其特征在于包括：

将待处理外周血与蛋白酶K混合，再加入第一缓冲液和权利要求1-2中任一项所述的改进的离心柱法外周血游离DNA提取试剂或权利要求3所述的试剂盒，混合均匀形成消化液，然后向所述消化液中加入无水乙醇，形成消化混合液，将所述消化混合液离心得到游离DNA。

5.根据权利要求4所述的改进的离心柱法外周血游离DNA提取方法，其特征在于，所述待处理外周血与蛋白酶K的体积比为5：1～20：1；和/或，所述蛋白酶K的酶活浓度范围为5mg/mL～30mg/mL。

6.根据权利要求5所述的改进的离心柱法外周血游离DNA提取方法，其特征在于，所述待处理外周血与蛋白酶K的体积比为10：1，和/或，所述蛋白酶K的酶活浓度范围为20mg/mL。

7.根据权利要求4所述的改进的离心柱法外周血游离DNA提取方法，其特征在于，所述第一缓冲液与待处理外周血的体积比为0.5：1～2：1；

和/或，所述待处理外周血与所述改进的离心柱法外周血游离DNA提取试剂的体积比为200：1～5000：1；

和/或，所述待处理外周血与无水乙醇的体积比为3：1～10：1。

8.根据权利要求7所述的改进的离心柱法外周血游离DNA提取方法，其特征在于，所述第一缓冲液与待处理外周血的体积比为1：1；

和/或，所述待处理外周血与所述改进的离心柱法外周血游离DNA提取试剂的体积比为1000：1；

和/或，所述待处理外周血与无水乙醇的体积比为2.5：1。

9.根据权利要求4所述的改进的离心柱法外周血游离DNA提取方法，其特征在于，所述消化液的温度为50℃～65℃，消化时间为0.2h～20h；优选的，所述消化液的温度为56℃，消化时间为6h。

10.根据权利要求7所述的改进的离心柱法外周血游离DNA提取方法，其特征在于还包括：将所述消化混合液分批加入离心柱中离心，先向离心柱中加入第二缓冲液，清洗离心柱，再向离心柱中加入第三缓冲液，清洗离心柱。

11.根据权利要求10所述的改进的离心柱法外周血游离DNA提取方法，其特征在于还包括：清洗离心柱后，将空的离心柱放置入离心机中离心2min，并室温晾干，然后向离心柱中加入第四缓冲液，洗脱得到的游离DNA。

12.根据权利要求11所述的改进的离心柱法外周血游离DNA提取方法，其特征在于，

所述第二缓冲液与所述待处理外周血的体积比为0.5：1～2：1；

和/或，所述第三缓冲液与所述待处理外周血的体积比为0.5：1～2：1；

和/或，所述待处理外周血与第四缓冲液的体积比为10：1～200：1；

和/或，洗脱温度为20℃～70℃。

13.根据权利要求12所述的改进的离心柱法外周血游离DNA提取方法，其特征在于，

所述第二缓冲液与所述待处理外周血的体积比为0.7：1；

和/或，所述第三缓冲液与所述待处理外周血的体积比为0.7：1；

和/或，所述待处理外周血与第四缓冲液的体积比为31.25：1；

和/或，洗脱温度为55℃。