[发明专利]一种富钙灵芝菌丝体的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种灵芝的高效药用价值开发的方法，具体地说是一种富钙灵芝菌丝体的生产方法。

背景技术

钙是生物必需的元素。对人体而言，无论肌肉、神经、体液和骨骼中，都有用Ca²⁺结合的蛋白质。钙是人类骨、齿的主要无机成分，也是神经传递、肌肉收缩、血液凝结、激素释放和乳汁分泌等所必需的元素。钙约占人体质量的1.4％，参与新陈代谢，每天必须补充钙；人体中钙含量不足会影响生长发育和健康。(1)儿童缺钙:不易入睡、不易进入深睡状态，入睡后爱啼哭、易惊醒，入睡后多汗；阵发性腹痛、腹泻，抽筋，胸骨疼痛，"X'型腿、"O"型腿，鸡胸，指甲灰白或有白痕；厌食、偏食；白天烦躁、坐立不安；智力发育迟、说话晚；出牙晚，10个月后才出牙，牙齿排列稀疏、不整齐、不紧密，牙齿呈黑尖形或锯齿形；头发稀疏；健康状况不好，容易感冒等。(2)青少年缺钙：会感到明显的生长疼，腿软、抽筋；乏力、烦躁、精力不集中，容易疲倦；偏食、厌食；蛀牙、牙齿发育不良；易过敏、易感冒等。(3)青壮年缺钙：一般情况下，青壮年都有繁重的生活压力，紧张的生活节奏往往使他们疏忽了身体上的一些不适，加之该年龄段缺钙又没有典型的症状，所以很容易掩盖病情。当有经常性的倦怠、乏力、抽筋、腰酸背疼、易过敏、易感冒等症状时，就应怀疑是否缺钙；钙的吸收几乎都是以有机螯合态的形式进行，生物体是不能直接吸收无机钙的，而灵芝具有广泛的药理作用，如抗肿瘤作用、免疫调节作用、镇静安神作用、强心及抗心肌缺血作用、调节血脂作用、平喘作用、保肝作用、抗缺氧和抗衰老作用等，如何培养基配方、让灵芝在深层液体培养时能够富集钙元素，使无机态的钙转化为有机态钙形成灵芝菌丝体结构的成分，为灵芝的高效药用价值开发提供了一种途径。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种让灵芝在深层液体培养时能够富集钙元素，使无机态的钙转化为有机态钙形成灵芝菌丝体结构的成分的富钙灵芝菌丝体的生产方法。

为了解决上述技术问题，本发明的富钙灵芝菌丝体的生产方法，包括以下步骤：

A:芝深层发酵培养

a、灵芝菌种培养：培养温度为25～26℃，

取灵芝菌种在菌种培养基中培养20～30天，所述菌种培养基的配方组成为：马铃薯200～250g、葡萄糖20～25g、磷酸二氢钾3～4g、七水硫酸镁1.5～2g、维生素B110～20mg、琼脂18～20g、水1000ml；

b、摇床种：保持温度在25～26℃，在30L搅拌罐中装入所述步骤1)中培养有灵芝菌种的菌种培养基，用水稀释，然后置于振荡器上，搅拌3～4天，控制搅拌速度为100～120转/min；

c、一级放大：保持温度在25～26℃，将所述步骤b中稀释搅拌后的培养基负压吸入300L种子罐中，培养2～3天；

d、二级放大：保持温度在25～26℃，将所述步骤c中搅拌后的培养基负压吸入1.5吨的种子罐中，培养2～3天；

e、发酵培养：保持温度在25～26℃，将所述步骤d中培养后的培养基负压吸入7吨的发酵罐中，并加入发酵培养基发酵，所述发酵培养基含有硝酸钙；

B、将7吨发酵罐中的灵芝发酵原液升温至45～55℃，加入20000u/g的酸性纤维素酶，加入量为发酵罐实际装量的0.0001～0.0004％，搅拌酶解3～4小时，得到灵芝酶解液；

C、将上述灵芝酶解液降至40～45℃，并加入质量浓度为10％的NaOH溶液，调节pH至7.0～9.0，加入发酵罐实际装量的0.006～0.012％的复合蛋白酶，搅拌酶解3～5小时，升温至85～95℃，灭酶活10～30分钟；

D、板框压滤：将所述步骤C酶解灵芝混合液取出，用50～60kg的压力压滤，除去固体物，得到灵芝酶解原液；

E、经过板框压滤后形成灵芝菌丝体，然后对灵芝菌丝体真空干澡并粉碎得到富钙灵芝菌丝体粉。

按质量百分数计，所述发酵培养基的配方组成为：玉米粉1～3％、蔗糖2～4％、硝酸钙0.01～0.02％，磷酸二氢钾0.01～0.02％、硫酸铵0.2～0.3％、酵母粉0.2～0.4％、豆油0.05～0.1％、余量为水；

所述得复合蛋白酶的质量组成为：

所述步骤A中e工序中，待达到以下标准时，发酵结束：待灵芝菌丝上无明显芽头和锁状联合现象，且菌丝变细，菌丝原生质凝集，菌丝有自溶现象发生时。

所述步骤A中e工序中，待达到以下标准时，发酵结束：菌丝湿重达到15～20％。