[发明专利]一种高效转染真核细胞的方法有效
| 申请号： | 201710084179.7 | 申请日： | 2017-02-16 |
| 公开（公告）号： | CN106811483B | 公开（公告）日： | 2020-04-07 |
| 发明（设计）人： | 张全伟;贡继尚;赵兴旭;张勇;马友记 | 申请（专利权）人： | 甘肃农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 730070 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 转染 真核细胞 方法 | ||
1.一种高效转染真核细胞的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
（1）受体细胞的培养
在转染前一天接种待转染细胞，接种密度为2×105/cm2，用含10%胎牛血清的DMEM液，37℃、5%CO2培养，待细胞占50～70%瓶底面积时，用于转染试验；
（2）转染液的制备
A液：用培养基MEM稀释1~10μg 浓度为10g/L的供体DNA，定量至100μL；
B液：将培养基MEM定量至100μL，然后吸取2~15μg的LR加入到MEM中，室温静置15分钟；
A/B复合物：将A液滴加入B液，轻轻弹下离心管壁，室温静置20min；
（3）转染
将配置好的Ca2+载体工作液加入培养好的细胞培养液中，摇匀，将所述A/B复合物缓缓加入步骤（1）中的细胞培养液中，摇匀，37℃温箱置6～24小时，观察转染效率；其中，所述Ca2+载体工作液配置为：MEM、15mmol/L Hepes、0.168mg/ml NaHCO3 以及5μmol/L A23187。
2.如权利要求1所述的高效转染真核细胞的方法，其特征在于，在步骤（3）中，所述Ca2+载体工作液的配置包括以下步骤：取1mg A23187在室温情况下，用1.9ml DMSO或DMSO/乙醇混合液溶解为1mmol/L A23187浓缩液；将所述A23187浓缩液、MEM、Hepes、NaHCO3比例混合，得到所述Ca2+载体工作液。
3.如权利要求1所述的高效转染真核细胞的方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述供体DNA利用去内毒素质粒大提试剂盒提取得到。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于甘肃农业大学，未经甘肃农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201710084179.7/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
