[发明专利]一种条件自杀性抗肿瘤靶向免疫细胞及其制备方法

说明书

本发明公开一种条件自杀性抗肿瘤靶向免疫细胞及其制备方法，包括步骤：A、利用DNA重组技术将细胞永生化基因插入第一克隆载体的克隆位点中并制成病毒颗粒；B、利用磁珠特异性选择人外周血中的一种免疫细胞，再利用步骤A中所制得的病毒颗粒感染，得永生化免疫细胞；C、利用DNA重组技术将自杀基因插入第二克隆载体中，然后转入所制得的永生化免疫细胞，即制得条件自杀性免疫细胞；D、利用DNA重组技术将单链抗体基因插入第三克隆载体的克隆位点中并制成病毒颗粒，再转染条件自杀性免疫细胞，得条件自杀性抗肿瘤靶向免疫细胞。解决了现有技术中肿瘤细胞靶向治疗副作用大、无法广泛临床应用、体内存活时间短、成本较高、可控性差的问题。

技术领域

本发明涉及免疫细胞领域，尤其涉及一种条件自杀性抗肿瘤靶向免疫细胞及其制备方法。

背景技术

免疫细胞对肿瘤细胞具有免疫监视和杀伤作用，尤其是携带有肿瘤特异性抗原递呈的单链抗体（ScFV）的免疫细胞能高效特异性的识别、结合以及杀死相关的肿瘤细胞。比如，携带有肿瘤特异性抗原递呈的单链抗体T淋巴细胞技术（CAR-T）在治疗急性淋巴细胞白血病以及淋巴瘤中，肿瘤患者的缓解率高达80%以上。然而，传统的CAR-T细胞技术具有潜在的细胞因子风暴等副作用，该副作用若不能有效控制，造成肿瘤患者死亡的概率在5-10%；另一方面，常规的CAR-T细胞技术需个性化制备每个患者的CAR-T细胞，更是限制了CAR-T技术不能真正广泛临床应用。而最近兴起的带有肿瘤特异性抗原递呈的单链抗体NK细胞技术（CAR-NK），虽然细胞因子风暴的概率大大降低，但其在体内存活时间短，需要多次注射，这样不仅大大提高治疗成本，可控性也较差。

因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种条件自杀性抗肿瘤靶向免疫细胞及其制备方法，旨在解决现有技术中肿瘤细胞靶向治疗副作用大、无法广泛临床应用、体内存活时间短、成本较高、可控性差的问题。

本发明的技术方案如下：

一种条件自杀性抗肿瘤靶向免疫细胞的制备方法，其中，包括步骤：

A、利用DNA重组技术将细胞永生化基因插入第一克隆载体的克隆位点，并通过病毒包装系统将第一克隆载体包装成病毒颗粒；

B、利用磁珠富集法特异性选择人外周血中的一种免疫细胞，然后利用含胎牛血清的DMEM培养基中进一步培养，得到扩大培养后的免疫细胞，再利用步骤A中所制得的病毒颗粒感染并进行传代培养，即得永生化免疫细胞；

C、利用DNA重组技术将自杀基因插入第二克隆载体中，构建自杀基因的克隆载体，然后将所述自杀基因的克隆载体转入所制得的永生化免疫细胞，即制得条件自杀性免疫细胞；

D、利用DNA重组技术将肿瘤抗原基因对应的单链抗体基因插入第三克隆载体的克隆位点，然后利用病毒包装系统构建含有单链抗体基因的病毒颗粒，并利用所述含有单链抗体基因的病毒颗粒转染条件自杀性免疫细胞，即得到条件自杀性抗肿瘤靶向免疫细胞。

一种条件自杀性抗肿瘤靶向免疫细胞的制备方法，其中，所述细胞永生化基因为SV40大T抗原永生化基因、端粒逆转录酶基因中的一种或多种。

一种条件自杀性抗肿瘤靶向免疫细胞的制备方法，其中，所述自杀基因为单纯孢疹病毒胸腺嘧啶激酶基因、大肠杆菌胞嘧啶脱氨基酶基因、人胸腺嘧啶核苷磷酸化酶基因中的一种或多种。