[发明专利]一种用SPF鸡胚细胞生产黄热病减毒活疫苗的工艺

说明书

本发明属于生物制品领域，具体涉及一种用SPF鸡胚细胞生产黄热病减毒活疫苗的工艺。本发明采用WHO提供的17D减毒疫苗株，经在鸡胚细胞传代适应制成毒种，接种细胞工厂培养的鸡胚细胞作为病毒培养的基质细胞，经培养后收集病毒液，再经过除菌，加入无明胶保护剂，然后冻干制备成品疫苗。疫苗效力指标符合于WHO规程，其它质量检验标准符合2015版《中国药典》第三部要求。用于预防黄热病传染。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用SPF鸡胚细胞生产黄热病减毒活疫苗的工艺。

背景技术：

黄热病是伊蚊传播的严重嗜内脏性及嗜神经性病毒性传染病，病死率很高，是非洲和南美洲许多国家非常关注的公共健康问题。在非洲，该病对33个国家的5.08亿人口构成严重威胁，大多发生在非洲亚撒哈拉贫困地区。在南美洲和非洲等流行区每年至少报告病例超过20万，死亡病例超过3万。我国虽不处于疫区，但是随着我国对外经济开放，每年往来于非洲、南美洲热带地区(劳务外出、公务访问、旅游探亲)的人员越来越多，黄热病的传播媒介-伊蚊分布很广，对黄热病病毒潜在危害越来越大。由于对黄热病没有针对性的治疗措施，疫苗接种是唯一有效的预防方法，因此对出国人员接种免疫预防是极为必要的，同时也要对黄热病病毒经回国人员的带入保持警惕，做好应对的准备。

我国目前国内生产黄热病疫苗。每年大约有三十万人份，主要用于出国人员接种。这些疫苗采用SPF鸡胚卵黄囊接种，鸡胚组织培养，经研磨等过过程制成全胚粗制疫苗。由于杂质蛋白多，存在着不安全因素，有必要加以改进。

为了保证人用疫苗安全性，国家药监局对疫苗采用生产基质细胞有严格规定。二倍体细胞因来自人体正常组织，经过严格的检定，证明是一种最安全的细胞，但因来源有限，不能满足大批生产需要。VERO细胞来自

非洲绿猴肾转化细胞，具有潜在的致瘤性，虽然WHO允许用于疫苗生产，但有严格的代次限制，国家也制定了严格的残留DNA控制标准。而一般原代动物细胞，存在着外源因子污染。只有SPF鸡胚细胞因为材料易得，外源因子污染少被国家药监局列为疫苗生产首选细胞。

本发明公开一种安全的黄热病疫苗生产工艺，可同样达到现有鸡胚生产黄热病减毒活疫苗WHO要求的疫苗效力和保护效果。本工艺疫苗杂质少，副反应小于传统生产工艺制造的疫苗，疫苗安全性更好。同时可大幅提高疫苗生产效率、降低成本。

发明内容

本发明一种用鸡胚细胞黄热病减毒活疫苗的生产工艺。具体为：采用细胞工厂培养鸡胚细胞为病毒培养基质细胞，接种经在鸡胚细胞传代适应的17D减毒疫苗株毒种，通过培养，收集病毒液，再经过除菌、纯化、加入保护剂后冻干制备成品疫苗。

本发明涉及一种用鸡胚细胞培养17D毒株生产黄热减毒活疫苗生产工艺。采用细胞工厂培养鸡胚细胞作为病毒培养基质细胞，接种经鸡胚细胞传代适应的17D减毒疫苗株毒种，经过培养，收集病毒液，再经过滤除菌后，加入冻干保护剂，冻干制备成品疫苗。

在一个优选例中，本发明所用的17D减毒疫苗株毒种为世界卫生组织(WHO)提供的17D-204毒株(NIBS CODE 213-77)。鸡胚细胞用SPF鸡胚制备。本发明所用的鸡胚细胞毒种为发明人经鸡胚细胞传代适应的毒种。毒种滴度按小鼠LD₅₀法滴度不低于5.60LD₅₀；蚀斑法滴定不低于5.8LgPFU/mL。

在另一个优选例中，本疫苗细胞培养方法为：

1).胰蛋白酶消化细胞浓度0.25％，pH为7.4～7.6。

2).鸡胚细胞培养液为含5％新生牛血清、0.3％水解乳蛋白、1％NaHCO₃、2mM谷氨酰胺的MEM培养基。

3).病毒.培养液为不含牛血清的DMEM溶液，加入2％～3％NaHCO₃,