[发明专利]一种抗枯萎病生物有机肥及其制备方法

说明书

技术领域

本申请属于生物肥料领域，具体地说，涉及一种抗枯萎病生物有机肥及其制备方法。

背景技术

生物防治是利用有益生物或其他生物来抑制或消灭有害生物的一种防治方法。区别于传统的农药防治植物病害的模式，生物防治的主体是从病区土壤和健康植株中分离病原菌拮抗微生物及其代谢产物，包括真菌、细菌、病毒和能分泌抗生物质的抗生菌，这类微生物常对人体和生态环境无害。因此，利用微生物及其代谢产物制备的生防菌剂代替化学药剂对植株病害进行防治已经成为了己成为世界范围内的发展方向。

土壤或植株中活性菌株数量的多少是生防菌剂有效防治植物病害的关键。因此在农业生产上要体现生防菌剂的效果就必须确保施入土壤的菌种能稳定存活并且大量繁殖。土壤是一个复杂的生态体系，存在多种能够影响微生物生存繁殖的环境因子，外来菌种很难快速适应各种复杂的土壤生态体系，特别是土壤中原有的土著微生物在与外来菌种的竞争中具有先天的优势，使外来菌种受到排斥或抑制。因此，改变生防微生物的应用方式，提高其在复杂生态体系中的生存能力，对保障生物防治效果有着积极的现实意义。

微生物固定化技术是生物工程中的一项新兴技术，通过化学或物理的方法将游离的微生物加以固定，使之成为具有高生物活性的固定化生长体，而且在适宜的条件下被固定的微生物还可以增殖，是一项能够被重复和连续使用的生物工程技术。固定化微生物制备的方法大致可分为四种:吸附法、包埋法、共价结合法、交联法。吸附法是将微生物细胞通过自然附着力吸附在载体表面，该法操作简单、条件温和、对细胞活性的影响小，但结合不牢固，细胞易脱落。包埋法是将微生物菌体包埋在半透性的聚合物凝胶或膜内，或使微生物细胞扩散进入多孔性的载体内部，常用的包埋材料包括聚乙烯醇，海藻酸钠等。目前这些方法主要应用于医药、食品和发酵工业以及废水处理等方面。早在上世纪90年代国外已开始采用固定化细胞技术制作微生物接种剂接种土壤，研究表明这种固定化接种剂用于土壤的效果非常明显，呈现出良好的应用前景用海藻酸钠包埋生防木霉菌株ThzID1-M3制备颗粒状生防菌剂，在土壤中可获得较高的定殖量。在国内，胡小加等(胡小加,江木兰,张银波.固定化植物促生菌的存活性研究[J].中国油料作物学报,2004,26(03):54-56.)运用此方法完成了对芽孢杆菌类的植物促生和生防微生物固定，结果表明，固定后的菌株能长期在土壤中有效定殖，并对作物土传病害表现出一定的抑制作用，但该方法仅仅将抗病菌株作为单一微生物菌剂使用，这就容易导致菌株进入土壤环境后因缺乏适宜的生长环境和必要的养分来源，定殖数量在达到峰值后会快速衰退并失去抑制土传病害的效用。

发明内容

有鉴于此，本申请针对上述的问题，提供了一种抗枯萎病生物有机肥及其制备方法，本发明中的微生物菌剂在施入土壤前已经与载体有机肥共同适应了至少6个月的时间，在共同适应期间，活性菌株数量始终保持较高含量。施入土壤后活性菌株既可以以载体有机肥作为养分来源，也可以与载体有机肥共同形成局部优势土壤环境，确保菌株活性的同时为植物生长提供全面的有机养分和矿质养分。

为了解决上述技术问题，本申请公开了一种抗枯萎病生物有机肥，按照质量份包括以下组分：有机肥50-150份和含菌沸石粉1份。

进一步地，有机肥为非动物源原料发酵有机肥，所述非动物源原料发酵有机肥总无机养分不高于6％，有机质大于30％，pH为5.0-8.5，水分小于等于30％。

进一步地，含菌沸石粉通过以下方法制备得到：将沸石粉碎并过100目筛，150-200℃干热灭菌20-60min后冷却，将灭菌后的沸石与AF11b菌液按照质量体积比(g/mL)为1:10-2:1的比例放入搅拌机内进行混合，搅拌速度为30-90转/min，混合时间为20-40min，静置6-18h后去除上清液，将沉淀取出烘干，烘干温度为40-80℃，时间为4-12h，烘干后的沸石进行粉碎，制备成含菌沸石粉。

进一步地，AF11b菌株菌液通过以下方法制备得到：选择利福平作为菌株AF11的标记抗生素，挑选在100μg/mL浓度水平下具备拮抗效果的突变菌株作为抗性标记菌株，定名为AF11b；将菌株AF11b放置于32℃培养箱24h活化，将活化好的菌株放入10L-50L-500L三级自动发酵罐中进行扩繁，培养基采用细菌培养基；扩繁中温度控制在30-35℃之间，当菌液OD₆₀₀值大于等于0.9时，发酵终止；制备得到菌株AF11b菌液，其中，细菌培养基具体为：每L培养基中含蛋白胨10g、酵母提取物5g和氯化钠10g。