[发明专利]一种用于核酸提取的功能化毛细管及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种用于核酸提取的功能化毛细管在核酸提取中的应用，其特征在于：所述的用于核酸提取的功能化毛细管，通过在毛细管内表面标记聚二烯丙基二甲基氯化铵，使得毛细管内表面带有大量正电荷，从而吸附带有负电性的核酸；

所述的用于核酸提取的功能化毛细管的制备方法，包括以下步骤：

(1)用盐酸清洗毛细管内部；

(2)用去离子水清洗毛细管内部；

(3)用NaOH溶液清洗毛细管内部；

(4)用去离子水清洗毛细管内部；

(5)用Tris-HCl溶液清洗毛细管内部；

(6)使聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液流过毛细管内部；所述的聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液的浓度为0.5％～10％；

(7)将毛细管在室温储存；

(8)用去离子水清洗毛细管内部；

(9)将毛细管置于氮气箱内干燥；得到用于核酸提取的功能化毛细管；

步骤(9)中所述的干燥的条件为30～70℃干燥10min或以上。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：

步骤(1)至步骤(3)及步骤(5)、(8)中所述的清洗的时间为30min～90min；

步骤(4)中所述的清洗的时间为30min～3h；

步骤(6)中所述的流过的时间为30min～90min；

步骤(7)中所述的室温储存的时间为10h或以上。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：

步骤(1)至步骤(6)及步骤(8)中的液体流速为1μL/min～100μL/min。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：

步骤(1)中所述的盐酸的浓度为0.5M～5M；

步骤(3)中所述的NaOH溶液的浓度为0.5M～5M；

步骤(5)中所述的Tris-HCl溶液的浓度为1mM～100mM；

步骤(5)中所述的Tris-HCl溶液的PH值为7.0～10.0。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：

步骤(6)中所述的聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液的浓度为2％。

6.根据权利要求1或5所述的应用，其特征在于：

步骤(6)中所述的聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液的溶剂PH值为7.0～10.0，其中包括1mM～100mM的Tris-HCl以及0.5M～5M的NaCl。

7.一种用于提取核酸的试剂盒在核酸提取中的应用，其特征在于所述的试剂盒包括权利要求1～6任一项中所述的用于核酸提取的功能化毛细管。

8.一种利用权利要求7中所述的试剂盒进行核酸提取的方法，其特征在于包括如下步骤：

①细菌培养液，离心，弃上清，收集菌体；

②用TE缓冲液重悬收集到的菌体，充分混匀；

③将重悬液置于水浴中，加热；

④取出，室温下静置；

⑤用权利要求1中所述的用于核酸提取的功能化毛细管小心吸取上清液至管内至少1/4位置处，左右倾斜毛细管，使溶液在毛细管内左右流动；

⑥竖直放置毛细管，使大部液体在重力作用下流出毛细管，剩余少量液体用力甩出；

⑦重复步骤⑤、⑥一次；

⑧毛细管内部吸附有分离得到的核酸，能直接用于原位PCR扩增及检测。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：

步骤③中所述的加热的条件为90～100℃加热5～20min。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：

步骤⑤中，吸取上清液至管内2/3位置处。

11.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：

步骤⑤中所述的左右流动的时间为20s或以上。