[发明专利]一种检测MTHFR基因突变的核酸组合及其应用和试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测MTHFR基因突变的核酸组合及其应用和试剂盒，属于基因检测技术领域。该检测MTHFR基因突变的核酸组合，其包括SEQ ID NO.1‑2所示的下游引物中的一种或两种、SEQ ID NO.3所示的上游引物以及SEQ ID NO.4所示的捕获探针，下游引物的5’端或上游引物的5’端标记有用于结合催化酶的亲和物。该核酸组合可针对MTHFR基因的C677T突变位点进行检测，其具有检测灵敏度高、特异性强、成本低、操作便捷等特点。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体而言，涉及一种检测MTHFR基因突变的核酸组合及其应用和试剂盒。

背景技术

MTHFR(5,10-methylenetetrahydrofolate reductase)全称为5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶，是叶酸和同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)代谢的一个关键酶。位于第一号染色体1p36.3位置。MTHFR全长19.3kb，共有外显子12个，mRNA全长7,105bp，编码657个氨基酸残基组成的蛋白，它的主要生化功能是催化5，10-亚甲基四氢叶酸还原为5-甲基四氢叶酸。MTHFR基因主要存在两种多态类型，分别为常见的C677T rs1801133、A1298Crs1801131，另外叶酸代谢循环上还有MTRR基因的A66G rs1801394位点。但实际上只有677位点的多态性与疾病及药物代谢的的关系是被公认的，并且被写入《医疗机构临床检验项目目录(2013年版)》中，该目录没有包括其他2个位点的检测，研究认为，以上位点多态性与多种疾病相关。

叶酸在细胞功能、分裂和分化中起着重要的作用，亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)能够参与叶酸代谢通路，催化5，10-亚甲基四氢叶酸转换成5-甲基四氢叶酸盐，使之参与同型半胱氨酸通路，为同型半胱氨酸提供甲基形成甲硫氨酸，进一步形成S-腺苷甲硫氨酸(SAM)，对维持细胞正常周期和细胞活性有着重要的作用。如果这两种途径所涉及到的酶发生缺陷或缺失，将导致通路的阻塞，使血液中的同型半胱氨酸的浓度增加，对血管壁产生损伤。同型半胱氨酸向甲硫氨酸的转换就会发生障碍，相继引发出一系列病理变化：(1)同型半胱氨酸堆积，导致甲基化作用的减弱，这就直接影响50多种重要物质的合成；(2)高浓度的同型半胱氨酸能损害血管的内皮细胞，成为重要的心脑血管致病因素；(3)高浓度的同型半胱氨酸作用于敏感的胚胎神经细胞，可造成无脑畸形和脊柱裂等不可逆损害；(4)同型半胱氨酸溶解性小，易于在泌尿系统形成结石。

在MTHRF基因多态性与出生缺陷关系的研究中，几乎所有的焦点都集中于神经管缺陷(NTD)，尽管MTHRF基因突变频率在不同国家和民族分布不同，但来自不同地区的大量研究均证实母亲MTHRF C677T突变是生育神经管缺陷患儿的遗传风险因素。一项分别对母亲、胎儿及父亲的MTHRF C677T突变研究表明，母亲677C/T纯合突变使出生神经管缺陷婴儿的风险升高2倍，胎儿677T/T纯合突变使NTD风险升高1.6倍。与MTHRF基因多态性关系密切的另一种出生缺陷是唐氏综合征。资料显示唐氏综合征患者的第3条21号染色体93％是母源性的，因此母亲的基因或代谢异常是发生唐氏综合征的主要风险因素。近年来的许多研究表明母亲MTHRF基因突变可导致MTHRF活性降低，使作为甲基间接工体的5-甲基四氢叶酸生成障碍，从而导致DNA的低甲基化和染色体异常。此外，MTHFR基因C677T位点多态性与非综合征性唇腭裂的发生存在关联。