[发明专利]一种基于T7启动子的重组表达质粒、转化子及其应用

权利要求书

1.一种重组表达质粒，包括：

目的基因及控制所述目的基因表达的T7启动子；

其特征在于，还包括：

T7RNA聚合酶基因及控制所述T7RNA聚合酶基因表达的糖诱导的严谨型启动子；

优选地，所述糖诱导的严谨型启动子为阿拉伯糖启动子、鼠李糖启动子或木糖启动子，所述重组表达质粒还包括转录调控蛋白基因及控制所述转录调控蛋白基因表达的启动子；

更优选地，所述糖诱导的严谨型启动子为阿拉伯糖启动子，所述重组表达质粒还包括araC基因或其突变体，及控制所述araC基因或其突变体表达的启动子。

2.如权利要求1所述的一种重组表达质粒，其中：所述重组表达质粒的复制子选自pSC101、ColE1、p15A、pMB1及这些复制子中等拷贝数的衍生复制子中的一种；进一步优选地，所述中等拷贝数为5-20个。

3.如权利要求1或2任一项所述的一种重组表达质粒，其中：所述重组表达质粒还包括标记基因及控制所述标记基因表达的启动子；进一步优选地，所述标记基因是抗性筛选标记基因；又进一步优选地，所述抗性筛选标记基因是氨苄霉素抗性基因、卡那霉素抗性基因、氯霉素抗性基因、链霉素抗性基因和四环素抗性基因中的一种或多种。

4.如权利要求1-3任一项所述的一种重组表达质粒，其中：所述控制所述araC基因或其突变体表达的启动子是来源于pKD46或大肠杆菌(Escherichia coli)基因组的阿拉伯糖操纵子的Pc启动子。

5.如权利要求1-4任一项所述的一种重组表达质粒，其中：所述T7RNA聚合酶基因是来源于大肠杆菌BL21(DE3)的基因组的T7RNA聚合酶基因、大肠杆菌JM109(DE3)的基因组的T7RNA聚合酶基因、噬菌体基因组的T7RNA聚合酶基因或者全基因合成的方法获得的T7RNA聚合酶基因；所述的控制所述T7RNA聚合酶基因表达的阿拉伯糖启动子是来源于pKD46或大肠杆菌基因组的阿拉伯糖操纵子的PBAD启动子。

6.如权利要求1-5任一项所述的一种重组表达质粒，其中：所述目的基因是编码多肽的聚核苷酸；所述的多肽是酶或多肽类药物；进一步优选地，所述的酶是氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂合酶、异构酶和连接酶中的至少一种，所述多肽类药物是激素、抗体和生长因子中的至少一种；又进一步优选地，所述裂合酶是脱羧酶，更进一步优选地，所述脱羧酶是氨基酸脱羧酶，又更进一步优选地，所述氨基酸脱羧酶是赖氨酸脱羧酶、酪氨酸脱羧酶、精氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶或谷氨酸脱羧酶。

7.根据权利要求6所述的一种重组表达质粒，其中，所述目的基因是是编码赖氨酸脱羧酶的聚核苷酸；优选地，所述编码赖氨酸脱羧酶的聚核苷酸是cadA基因、ldcC基因、haldc基因、cadA基因的片段、ldcC基因的片段或haldc基因的片段。

8.一种转化子，其特征在于，所述转化子的重组表达质粒是如权利要求1-7任一项所述的重组表达质粒；

或者，所述转化子包括：

目的基因及控制所述目的基因表达的T7启动子；

T7RNA聚合酶基因及控制所述T7RNA聚合酶基因表达的糖诱导的严谨型启动子；

优选地，所述糖诱导的严谨型启动子为阿拉伯糖启动子、鼠李糖启动子或木糖启动子，所述重组表达质粒还包括转录调控蛋白基因及控制所述转录调控蛋白基因表达的启动子；

更优选地，所述糖诱导的严谨型启动子为阿拉伯糖启动子，所述转化子还包括araC基因或其突变体，及控制所述araC基因或其突变体表达的启动子；

所述目的基因及控制所述目的基因表达的T7启动子、所述T7RNA聚合酶基因及控制所述T7RNA聚合酶基因表达的糖诱导的严谨型启动子、所述转录调控蛋白基因及控制所述转录调控蛋白基因表达的启动子分别位于两个或三个可共存的重组表达质粒上。

9.如权利要求8所述的转化子，其中，所述转化子的重组表达质粒是如权利要求7任一项技术方案所述的重组表达质粒。