[发明专利]一种基于T7启动子的重组表达质粒、转化子及其应用

说明书

本发明涉及一种重组表达质粒，特别涉及一种基于T7启动子的重组表达质粒，本发明还涉及包含该重组表达质粒的转化子，本发明还涉及该转化子的应用，特别是在发酵生产肽如赖氨酸脱羧酶方面的应用，及进一步生产1,5‑戊二胺方面的应用。一种重组表达质粒，包括：质粒骨架；复制子；目的基因及控制所述目的基因表达的T7启动子；T7RNA聚合酶基因及控制所述T7RNA聚合酶基因表达的糖诱导的严谨型启动子如阿拉伯糖启动子。一种转化子，所述转化子的重组表达质粒如上文所述。一种发酵生产多肽的方法，包括培养如上文任一项技术方案所述的转化子的步骤。本发明降低了目前的诱导型的重组表达诱导剂的成本。

技术领域

本发明涉及一种重组表达质粒，特别涉及一种基于T7启动子的重组表达质粒，本发明还涉及包含该重组表达质粒的转化子，本发明还涉及该转化子的应用，特别是在发酵生产多肽如赖氨酸脱羧酶方面的应用，及进一步生产1,5-戊二胺方面的应用。

背景技术

本发明涉及的是一种核酸序列的组成以及用该序列进行酶、蛋白质或多肽(统称多肽)的大量的表达。在酶、蛋白质或多肽的研究中，多数涉及到蛋白/酶/多肽的结构以及功能研究，如蛋白质或酶的三维结构研究，酶的催化性能研究以及酶在医疗、工业、农业领域的应用，如蛋白药物、疫苗、淀粉酶、蛋白酶之类的。在这类研究中就需要对酶、蛋白质或多肽进行大量的有功能的表达。

目前酶、蛋白质或多肽的表达系统有多种，主要分为真核表达系统(如植物细胞表达系统、哺乳动物细胞表达系统、昆虫表达系统、酵母表达系统)和原核表达系统(大肠杆菌表达系统、蜂房哈夫尼菌表达系统、枯草芽孢杆菌表达系统)。在这些系统中真核表达系统因为其具有完善的转录后修饰、翻译后修饰、糖基化等功能，特别适合于表达来源于真核细胞的酶、蛋白质或多肽。但是真核表达系统也存在其自身的缺点，比如细胞培养操作较为苛刻、培养使用的培养基较为昂贵、培养周期较长等。因此真核细胞表达系统多用于在原核系统中无法正常功能化表达且附加值较高的酶、蛋白质或多肽。而原核系统则因为其易于培养操作、发酵培养基便宜易得、较短的发酵周期以及简单的后处理等成为了酶、蛋白质或多肽的研究或应用过程中首选的表达系统。