[发明专利]一种原料乳中抗生素残留的快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种原料乳中抗生素残留的快速检测方法，属于生物技术领域。

背景技术

原料乳中抗生素是指动物产品的任何可食部分所含兽药的母体化合物及其代谢物，及与兽药有关的杂质。泌乳动物在饲养过程中由于不合理使用治疗药物，导致其乳中广泛存在原料乳中抗生素残留。目前，原料乳中抗生素残留仍然是全球控制牛奶安全最为重要的问题之一，尤其是对中国来说，奶牛疾病的发生率高，奶牛专用药剂比较少，奶牛用药较混乱，致使有些疾病治疗的效果不理想，原料奶药检超标时有出现。虽然中国在兽药残留标准体系建设和兽药残留方法检测方面已经取得了长足的进步，但与相关国际组织和发达国家相比，与近年来发生的重大乳品安全事件所引起的民众恐慌相比，中国的牛奶中兽药残留体系建设还不完善，还需要进一步健全。

快速检测方法首先是能缩短检测时间，以及在样品制备、实验准备、操作过程简化和自动化上简化方法。无论在重大社会活动中，还是在日常卫生监督过程中，除感官检测外，针对常见引发急性中毒的有毒物质或重要控制环节开展现场快速检测，对某些慢性伤害物质可能大量超标以及劣质食品的快速检测，对餐饮具、食物加工器具表面洁净度的快速检测，对化学消毒剂有效成分的快速检测等，能在现场及时发现可疑问题，迅速采取相应措施，这对提高监督工作效率和力度，保障卫生安全有着重要的意义。

根据《GB/T 4789.27-2008鲜乳中抗生素残留检验》第二方法嗜热脂肪地芽胞杆菌抑制法中，但是此种方法检测时间较长，不利于现场的快速检测，不利于提高检测效率。

发明内容

为解决现有技术检测时间长、检测效率低的问题，本发明提供了一种原料乳中抗生素残留的检测方法，采用的技术方案如下：

本发明的目的在于提供一种原料乳中抗生素残留的检测方法，该方法包括如下步骤：

1)将冷冻干燥保存的嗜热脂肪地芽胞杆菌加入到营养肉汁琼脂培养基中进行活化培养，将活化后的嗜热脂肪地芽胞杆菌接种到磷酸盐缓冲液中，并进行计数，使其浓度约为1×10⁸CFU/mL，获得嗜热脂肪地芽胞悬浮液；

2)在溴甲酚紫蛋白胨培养基中加入嗜热脂肪地芽胞悬浮液，混合均匀后进行计数，使芽孢的终浓度约为1×10⁶CFU/mL-2×10⁶CFU/mL，获得嗜热脂肪地芽胞杆菌测试培养基，备用；

3)将测试培养基与待检测原料乳按照体积比为2:1-3:1混合均匀，同时设置阳性对照和阴性对照，阳性对照为与待检测原料乳的体积相同的抗生素标准参照溶液，阴性对照为与待检测原料乳的体积相同的无抗生素的脱脂乳，在75℃-80℃下水浴培养2.0h-2.2h，观察培养基颜色的变化，如果颜色没有变化，须再于水浴中培养30min作最终观察。

优选地，步骤1)所述营养肉汁琼脂培养基包含蛋白胨5.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl 5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.0。

优选地，步骤1)所述活化培养的温度为55℃。

优选地，步骤1)所述活化培养过程中加入5mg MnSO₄·H₂O。

优选地，步骤3)所述水浴培养的温度为75℃。

更优选地，本发明的测试体积(测试培养基和待检测原料乳的总体积)为600μL。

更优选地，本发明所述的方法，包括如下步骤：

1)将冷冻干燥保存的嗜热脂肪地芽胞杆菌加入到营养肉汁琼脂培养基中进行活化培养，将活化后的嗜热脂肪地芽胞杆菌接种到磷酸盐缓冲液中，并进行计数，使其浓度约为1×10⁸CFU/mL，获得嗜热脂肪地芽胞悬浮液；

2)在溴甲酚紫蛋白胨培养基中加入嗜热脂肪地芽胞悬浮液，混合均匀后进行计数，使芽孢的终浓度约为1×10⁶CFU/mL-2×10⁶CFU/mL，获得嗜热脂肪地芽胞杆菌测试培养基，备用；

3)将测试培养基与待检测原料乳按照体积比为2:1混合均匀，同时设置阳性对照和阴性对照，阳性对照为与待检测原料乳的体积相同的抗生素标准参照溶液，阴性对照为与待检测原料乳的体积相同的无抗生素的脱脂乳，在75℃下水浴培养2.0h-2.2h，观察培养基颜色的变化，如果颜色没有变化，须再于水浴中培养30min作最终观察。

本发明有益效果：