[发明专利]苋属的实时荧光PCR鉴定方法

权利要求书

1.一种苋属的实时荧光PCR鉴定方法，其特征在于，该鉴定方法包括以下步骤：

步骤1，苋属DNA提取：

取样本2g，液氮研磨至粉末状，取0.2g研磨后的粉末状样品用试剂盒提取DNA，将提取到的DNA溶解在50μL去离子水中，将得到的DNA样品置于-20℃冰箱保存、备用；

步骤2，特异性引物和探针的设计：

基于叶绿体的PsbA基因，设计选取具有苋属特异性的引物和探针，所述特异性引物和探针分别为：

F：AGGAGCAATGCCGTTTTCTT，

R：CAGTATTCAGAACTTGCCTTTGA，

P：FAM-TGTCAAGAAATTGGTTATTGCTCC-Eclipse，

步骤3，TaqMan实时荧光PCR：

将步骤2设计选取的引物和探针对步骤1中的DNA样品进行荧光PCR扩增反应，通过荧光PCR扩增后得到Ct值，通过Ct值对样品是否含有苋属进行判定。

2.根据权利要求1所述的苋属的实时荧光PCR鉴定方法，其特征在于，所设计的引物和探针对苋属具有物种的特异性，能用于苋属的鉴定。

3.根据权利要求1所述的苋属的实时荧光PCR鉴定方法，其特征在于，所述步骤3中实时荧光PCR扩增反应体系如下：10μL Premix Ex Taq，10pmol/μL的上游引物0.4μL，10pmol/μL的下游引物0.4μL，10pmol/μL的探针0.4μL，取上述提取得到DNA液2μL，用去离子水补足体积至20μL，应用荧光定量PCR仪进行反应，反应程序为(1)95℃，10sec；(2)95℃，5sec；62℃，23sec；40个循环，所述实时荧光PCR均重复三次，取三次结果的平均Ct值，当平均Ct值＞35.0或无Ct值，则判定为阴性，当Ct值≤35.0，则判定为阳性。