[发明专利]一种基于直接竞争酶联免疫法检测铬离子试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种基于直接竞争酶联免疫法铬离子检测试剂盒，包括：包被有羊抗鼠IgG二抗的检测板，所述检测板真空密封包装；所述羊抗鼠IgG二抗的包被浓度为50～200μg/mL；质量浓度为20～50μg/mL的酶标Cr‑ITCBE鳌合物半抗原；质量浓度为10～20μg/mL的抗铬离子单克隆抗体溶液；所述抗铬离子单克隆抗体溶液由Cr‑ITCBE‑cBSA免疫原免疫Balb/C小鼠制备而来；1.0～3.0mol/L的终止液；样品稀释液；底物显色液；洗涤液；铬离子标准品溶液；质量浓度为10～20mg/mL的EDTA处理液。本发明提供试剂盒具有灵敏度高、特异性强的特点，同时具有检测时间短的优点。

技术领域

本发明属于环境检测技术领域，具体涉及一种基于直接竞争酶联免疫法检测铬离子试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

近年来我国许多地方的饮用水源受到污染，各类重金属离子的污染事件频发，人们的身心健康受到严重威胁。其中工业三废(废水、废气、废渣)对环境造成了极大的破坏，如工矿、电池、电镀、化工等行业的工业废水中含有大量的重金属离子。在各种重金属离子污染源中，铬元素是一类广泛存在的有毒元素，严重威胁着家畜及人类的健康。铬元素经呼吸道侵入时，会损害上呼吸道，引起咽炎、鼻炎、支气管炎，长期作用还会引起肺气肿、支气管扩张，肺硬化及肺癌等。我国《生活饮用水卫生标准》规定饮用水中铬离子含量不得超过50ng/mL，食品铬含量(GB14961-94)规定粮食类食品中不得超过1000ng/mL，果蔬类食品中不得超过500ng/mL，动物性食品肉蛋中不得超过1000ng/mL。

目前动物性食品及环境水样中Cr³⁺污染的主要检测方法包括传统的理化检验和免疫学检验两种类型的方法。理化检验包括紫外分光光度法(UV)、电化学分析法、原子吸收光谱法(AAS)、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)、氢化物发生-原子荧光光谱法(HG-AFS)和中子活化分析法(NAA)等，它们是目前Cr³⁺污染检测的主要方法，灵敏度高，结果准确，但由于需要昂贵的仪器设备、熟练的专业人员、烦琐费时、周期长、费用高、不能现场操作、样品筛检量小等缺陷，其应用受到了限制。免疫学检验方法是以抗原抗体分子的特异性、可逆性反应为基础的分析技术，包括荧光偏振免疫测定法(FPIA)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、KinExA免疫测定法(KIA)、胶体金免疫层析试验测定法(GICA)和微悬臂梁免疫传感器(MIS)等，由于抗原抗体的结合具有高度的选择性和敏感性，这一技术具有简便、快速、敏感、特异、经济、筛检量大等优势，代表着重金属离子检测的发展方向。目前，国内外重金属铬离子污染免疫检测技术研究非常活跃，其中公告号为CN103439508B的专利公开了一种用于检测铬离子的间接竞争酶联免疫试剂盒及其组建和检测方法，其检测灵敏度为2ng/mL，并且检测时间较长。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于直接竞争酶联免疫法检测铬离子试剂盒及其应用，使所述试剂盒具有检测时间短的优点，同时具有灵敏度高、特异性强的特点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种基于直接竞争酶联免疫法铬离子检测试剂盒，包括：

(1)包被有羊抗鼠IgG二抗的检测板，所述检测板真空密封包装；所述羊抗鼠IgG二抗的包被浓度为50～200μg/mL；

(2)质量浓度为20～50μg/mL的酶标Cr-ITCBE鳌合物半抗原溶液；

(3)质量浓度为10～20μg/mL的抗铬离子单克隆抗体溶液；所述抗铬离子单克隆抗体溶液由Cr-ITCBE-cBSA免疫原免疫Balb/C小鼠制备而来；

(4)1.0～3.0mol/L的终止液；

(5)样品稀释液；

(6)底物显色液；