[发明专利]用于检测鱼传染性造血器官坏死病毒的荧光LAMP引物在审
| 申请号： | 201710100750.X | 申请日： | 2017-02-23 |
| 公开（公告）号： | CN106591497A | 公开（公告）日： | 2017-04-26 |
| 发明（设计）人： | 薄清如;罗宝正;徐海聂;赵福振;王小玉;邵建宏;廖秀云;林志达 | 申请（专利权）人： | 珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京国坤专利代理事务所(普通合伙)11491 | 代理人： | 姜彦 |
| 地址： | 519015 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 检测 传染性 造血 器官 坏死 病毒 荧光 lamp 引物 | ||
1.一种用于检测鱼传染性造血器官坏死病毒的荧光LAMP引物，其特征在于，所述用于检测鱼传染性造血器官坏死病毒荧光LAMP引物的序列为：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6。
2.一种如权利要求1所述用于检测鱼传染性造血器官坏死病毒荧光LAMP引物的合成方法，其特征在于，所述合成方法包括以下步骤：
按照LAMP引物设计原则，根据GenBank数据库中下载IHNV基因组序列，进行多序列比对，寻找IHNV的一段保守基因作为扩增对象，然后通过分子生物学软件LAMP Designer 1.1.4设计引物；采用HPLC纯化方式；合成后的引物用DEPC水稀释成100μmol/L溶液，-20℃保存备用。
3.一种利用权利要求1所述用于检测鱼传染性造血器官坏死病毒荧光LAMP引物的鱼传染性造血器官坏死病毒的检测方法，其特征在于，所述鱼传染性造血器官坏死病毒的检测方法包括以下步骤：
步骤一，样品的核酸提取：按照核酸提取试剂盒Mag-BindViral DNA/RNA Kit200说明书提取样品核酸；
步骤二，反应管中成分配制：LAMP反应体系总体积为25μL，其中2×Taq反应液RM 12.5μL，内引物FIP、BIP 40μmol/L各1.0μL，环引物LF和LB各1.0μL，外引物F3、B3 5μmol/L各1.0μL，Bst DNA polymerase 0.8μL，逆转录酶0.2μL，荧光染料0.5μL，病毒核酸2.0μL，补水至25.0μL；最后加20.0μL的封闭液以避免体系挥发和产物污染；
步骤三，仪器检测：在荧光PCR仪上反应条件调整为保温阶段63℃30s，1个循环；循环阶段63℃15s，63℃45s，60个循环；于63℃45s处收集荧光信号，荧光通道选为FAM。
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