[发明专利]用于检测水疱性口炎病毒的荧光LAMP引物及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测水疱性口炎病毒的荧光LAMP引物，其特征在于，所述用于检测水疱性口炎病毒的荧光LAMP引物序列为：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6。

2.一种如权利要求1所述用于检测水疱性口炎病毒的荧光LAMP引物的合成方法，其特征在于，所述合成方法包括：

根据GenBank数据库中水疱性口炎病毒的基因序列，选取其NP基因上的一段高度保守区作为扩增对象，使用分子生物学软件LAMP designer1.14设计实时荧光LAMP引物，采用HPLC方式进行纯化，并将合成后的引物用灭菌DEPC水稀释成100μmol/L溶液，保存于-20℃。

3.一种利用权利要求1所述用于检测水疱性口炎病毒的荧光LAMP检测方法，其特征在于，所述用于检测水疱性口炎病毒的荧光LAMP检测方法包括以下步骤：

步骤一，样品的核酸提取：按照核酸提取试剂盒Mag-Bind Viral DNA/RNA Kit说明书提取样品核酸；

步骤二，反应管中成分配制：LAMP反应体系总体积为25μL，其中2×Taq反应液RM 12.5μL，40μmol/L的内引物FIP和BIP各1μL，20μmol/L的环引物LF和LB各1μL，5μmol/L的外引物F3和B3各1μL，Bst DNApolymerase 0.8μL，逆转录酶0.2μL，病毒核酸2.0μL，补水至25.0μL；最后加20.0μL的封闭液以避免体系挥发和产物污染；

步骤三，仪器检测：在荧光PCR仪上反应条件调整为保温阶段63℃30s，1个循环；循环阶段63℃15s，63℃45s，60个循环；于63℃45s处收集荧光信号，荧光通道选为FAM。

4.如权利要求3所述的用于检测水疱性口炎病毒的荧光LAMP检测方法，其特征在于，所述用于检测水疱性口炎病毒的荧光LAMP检测方法的内引物FIP和BIP浓度为1.6μmol/L、外引物F3和B3浓度为0.2μmol/L、环引物LF和LB浓度为0.8μmol/L，反应温度为63℃。