[发明专利]利用数字PCR检测大麦条纹花叶病毒的方法及其专用成套试剂

权利要求书

1.检测大麦条纹花叶病毒的成套试剂，由引物对X1和探针BSMV-p组成；所述引物对X1由引物BSMV-f和引物BSMV-r组成；所述引物对X1的靶序列含有特异DNA片段；所述特异DNA片段为如下y1)或y2)：

y1)序列表的序列4所示的单链DNA分子；

y2)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；

所述探针BSMV-p为20-30个核苷酸组成的单链DNA分子，与所述特异DNA片段中的部分区段相同。

2.如权利要求1所述成套试剂，其特征在于：

所述引物BSMV-f为如下a1)或a2)：

a1)序列表中序列1所示的单链DNA分子；

a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的单链DNA分子；

所述引物BSMV-r为如下b1)或b2)：

b1)序列表中序列2所示的单链DNA分子；

b2)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的单链DNA分子；

所述探针BSMV-p为如下c1)或c2)：

c1)序列表中序列3所示的单链DNA分子；

c2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子。

3.如权利要求1或2所述成套试剂，其特征在于：所述探针BSMV-p的末端具有荧光标记。

4.权利要求1或2所述成套试剂中的所述引物对X1。

5.c1)或c2)：

c1)权利要求1至3任一所述成套试剂的制备方法，为将权利要求1至3任一所述成套试剂中的所述引物BSMV-f、所述引物BSMV-r和所述探针BSMV-p分别单独包装；

c2)权利要求4所述引物对X1的制备方法，为将权利要求4所述引物对X1中各引物分别单独包装。

6.权利要求1至3任一所述成套试剂或权利要求4所述引物对X1的应用，为如下d1)或d2)或d3)或d4)：

d1)制备用于检测或辅助检测大麦条纹花叶病毒的试剂盒；

d2)检测或辅助检测待测样品中是否含有或疑似含有大麦条纹花叶病毒；

d3)制备用于鉴定或辅助鉴定大麦条纹花叶病毒的试剂盒；

d4)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为候选的大麦条纹花叶病毒。

7.含有权利要求1至3任一所述成套试剂或权利要求4所述引物对X1的试剂盒。

8.权利要求7所述试剂盒的应用，为如下d2)或d4)：

d2)检测或辅助检测待测样品中是否含有或疑似含有大麦条纹花叶病毒；

d4)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为候选的大麦条纹花叶病毒。

9.一种检测待测样品是否含有大麦条纹花叶病毒的方法，为A1)或A2)或A3)：

A1)以待测样品的cDNA为模板，以权利要求1至3任一所述成套试剂进行数字PCR，然后进行如下评判：如果所述成套试剂可以实现对所述cDNA的数字PCR，则待测样品中含有或疑似含有大麦条纹花叶病毒；如果所述成套试剂不能实现对所述cDNA的数字PCR，则所述待测样品不含有或疑似不含有大麦条纹花叶病毒；

A2)以待测样品的cDNA为模板，以权利要求4所述引物对X1进行PCR扩增，然后进行如下评判：如果所述引物对X1可以实现对所述cDNA的PCR扩增，则待测样品中含有或疑似含有大麦条纹花叶病毒；如果所述引物对X1不能实现对所述cDNA的PCR扩增，则所述待测样品不含有或疑似不含有大麦条纹花叶病毒；

A3)检测待测样品的cDNA中是否含有特异DNA片段，然后进行如下评判：如果待测样品的cDNA中含有特异DNA片段，则待测样品中含有或疑似含有大麦条纹花叶病毒；如果待测样品的cDNA中不含有特异DNA片段，则待测样品不含有或疑似不含有大麦条纹花叶病毒；

所述特异DNA片段为如下y1)或y2)：

y1)序列表的序列4所示的单链DNA分子；

y2)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子。

10.一种鉴定待测病毒是否为候选的大麦条纹花叶病毒的方法，为B1)或B2)或B3)：

B1)以待测病毒的cDNA为模板，以权利要求1至3任一所述成套试剂进行数字PCR，然后进行如下评判：如果所述成套试剂可以实现对所述cDNA的数字PCR，则待测病毒为候选的大麦条纹花叶病毒；如果所述成套试剂不能实现对所述cDNA的数字PCR，则待测病毒为候选的非大麦条纹花叶病毒；

B2)以待测病毒的cDNA为模板，以权利要求4所述引物对X1进行PCR扩增，然后进行如下评判：如果所述引物对X1可以实现对所述cDNA的PCR扩增，则待测病毒为候选的大麦条纹花叶病毒；如果所述引物对X1不能实现对所述cDNA的PCR扩增，则待测病毒为候选的非大麦条纹花叶病毒；

B3)检测待测病毒的cDNA中是否含有特异DNA片段，然后进行如下评判：如果待测病毒的cDNA中含有特异DNA片段，则待测病毒为候选的大麦条纹花叶病毒；如果待测病毒的cDNA中不含有特异DNA片段，则待测病毒为候选的非大麦条纹花叶病毒；

所述特异DNA片段为如下y1)或y2)：

y1)序列表的序列4所示的单链DNA分子；

y2)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子。