[发明专利]利用水凝胶微笼捕获蛋白质的方法

权利要求书

1.一种利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）使超支化聚丙三醇水溶液、双巯基聚乙二醇水溶液、带有标记的待捕获蛋白肽单体溶液在微流控芯片上混合得到混合液，然后使所述混合液、油相物质在所述微流控芯片上混合，获得微液滴，所述微液滴内，所述超支化聚丙三醇和双巯基聚乙二醇发生巯基-烯的点击化学反应形成水凝胶，得到外层为油相内层为含有蛋白肽溶液的微凝胶；

（2）对所述微凝胶进行培养使其中的蛋白肽单体发生折叠聚集，得到外层为油相内层含有不同折叠程度的聚合蛋白的微凝胶；

（3）向经过步骤（2）的体系中加入脱乳化剂以破坏所述油相外层并进行清洗以除去所述微凝胶内小于所述微凝胶孔道的聚合蛋白或未聚合蛋白，即得捕获了蛋白的水凝胶微笼，所述捕获了蛋白的水凝胶微笼可用于后续的检测分析；所述脱乳化剂为全氟辛醇油。

2.根据权利要求1所述的利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述微流控芯片包括芯片本体，形成于所述芯片本体上且在一端部相交汇构成第一聚焦区的第一微通道、第二微通道和第三微通道，形成于所述芯片本体上且在一端部相交汇构成第二聚焦区的第四微通道、第五微通道和第六微通道，以及形成于芯片本体上的第七微通道，其中所述第四微通道的另一端与所述第一聚焦区连通，所述第七微通道的一端与所述第二聚焦区连通，将超支化聚丙三醇水溶液、双巯基聚乙二醇水溶液、带有标记的待捕获蛋白肽溶液分别注入所述第一微通道、第二微通道和第三微通道，三者在所述第一聚焦区混合得到所述混合液，分别向所述第五微通道和第六微通道内注入所述油相物质，混合液经第四微通道流到第二聚焦区，在第二聚焦区与从第五微通道和第六微通道内注入的油相物质混合形成所述微液滴。

3.根据权利要求2所述的利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：所述方法还包括以软刻蚀法制作所述微流控芯片的步骤，该步骤包括如下几步：

i)将设计好的第一微通道、第二微通道、第三微通道、第四微通道、第五微通道以及第六微通道印刷在醋酸膜上，并将醋酸膜放置于涂覆有光刻胶的硅晶片顶部，经过紫外光照射，得到芯片模板；

ii)将聚二甲基硅氧烷预聚物和交联剂灌注在所述芯片模板上，进行固化，将固化的聚二甲基硅氧烷模具剥离芯片模板，并对各所述微通道的出入口进行压力穿孔，之后运用表面平整的基底对各微通道进行密封;

iii)将表面疏水剂注入各微孔通道并静置，使得微通道表面疏水即得所述微流控芯片。

4.根据权利要求1所述的利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述带有标记的待捕获蛋白肽单体溶液通过先采用有机荧光素对蛋白肽单体侧链的N-末端进行荧光标记，然后溶解于0.5%~2%的氨水中制备预备蛋白肽单体溶液，最后以pH 7-8的缓冲液稀释成设定浓度得到。

5.根据权利要求1所述的利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述双巯基聚乙二醇水溶液通过将2-亚氨基硫烷盐酸盐与聚乙二醇双胺在pH为7-8的缓冲溶液中反应得到。

6.根据权利要求1所述的利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述蛋白肽单体为人β淀粉样蛋白1-40，人β淀粉样蛋白1-42，tau蛋白或a-突触核蛋白。

7.根据权利要求1所述的利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述油相物质为选自氟化液、矿物类油、植物油及脂肪酸中的一种或多种的组合。

8.根据权利要求2或7所述的利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述超支化聚丙三醇和双巯基聚乙二醇水溶液的流速均为10-400微升/小时、所述带有标记的待捕获蛋白肽单体溶液的流速为10-400微升/小时，所述油相的流速为400-4000微升/小时，所述微液滴生产速度为0.2-10千赫兹。