[发明专利]应用于质粒DNA提取的快速沉淀缓冲液及其应用

说明书

本发明涉及应用于质粒DNA提取的快速沉淀缓冲液及其应用。其中，该快速沉淀缓冲液综合离液盐和表面活性剂的效果，能够中和NaOH，并且提高体系中的盐浓度，使蛋白质、基因组DNA和RNA发生盐析沉淀，碱裂解后加入所述应用于质粒DNA提取的快速沉淀缓冲液，使得大部分蛋白质、基因组DNA、非超螺旋质粒DNA和RNA都以不溶物状态存在，形成更紧密的团块，避免形成絮状的漂浮在溶液表面的蛋白物质，极大的缩短了离心的时间，不仅能用于高拷贝和低拷贝质粒的提取，也适用于不同培养基培养大肠杆菌质粒的提取，大大节省了实验研究者的时间，提高了实验效率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，本发明涉及一种应用于质粒DNA提取的快速沉淀缓冲液、纯化质粒DNA的方法、制备质粒DNA的方法、该缓冲液在制备、纯化质粒DNA中的用途和试剂盒。

背景技术

质粒DNA的提取和纯化是分子生物学的基本步骤之一，涉及了基因克隆、基因序列分析、核酸疫苗、基因治疗和各种基因重组等领域。质粒一般有三种构象，即超螺旋，线形和开环质粒(开环质粒是指双链环状的质粒DNA有部分解链，因此电泳速度最慢)。三种构象的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋线形开环，线形的质粒在中间，而开环的质粒在最后。判断质粒好坏的一个指标就是超螺旋质粒的含量多少。因为用质粒转染真核细胞时，超螺旋的质粒效率最高，所以要求质粒中超螺旋质粒的含量要在90％以上，这也是对作为核酸疫苗重组质粒的要求。从原核生物中提取和纯化质粒DNA的经典步骤为：菌体裂解、质粒分离和纯化。目前菌体裂解最常用的方法有：一步法质粒提取法和碱裂解法。一步法质粒提取法是由德国Eppendorf公司发明。它是一种基于溶菌酶裂解细菌的提取方法。该方法使用含有溶菌酶和去污剂的裂解液裂解细胞，裂解产物澄清无粘性，裂解后无需离心可直接与过滤膜进行结合，然后通过快速离心的清洗和洗脱得到超螺旋的质粒DNA。该提取方法虽然方便，快捷和重复性好，但不适合于低拷贝质粒的提取和丰富培养基培养大肠杆菌质粒的提取。碱裂解法质粒DNA纯化技术是1979年由BirnboimDoly发明。该方法仍是分子克隆研究中最常用的方法之一，其操作包括三种溶液处理，一般需要20分钟左右的时间才能完成质粒的提取。该提取方法适用面较广，重复性好，但实验周期相对较长，超螺旋质粒含量低，影响了研究者的实验进程。

现有质粒DNA的提取和纯化方法仍然有待改进。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。

本发明是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：

基于碱裂解法，采用一种创新的应用于质粒DNA提取的快速沉淀缓冲液，可以对整个质粒提取流程进行优化。快速沉淀缓冲液综合离液盐和表面活性剂的效果，可以促进质粒提取过程中的变性蛋白形成更紧密的团块，避免形成絮状的漂浮在溶液表面的蛋白物质。极大的缩短了离心的时间，可以使整个质粒提取由传统的20分钟缩短到6分钟左右，同时超螺旋质粒含量在90％以上，不仅能用于高拷贝和低拷贝质粒的提取，也适用于不同培养基培养大肠杆菌质粒的提取，大大节省了实验研究者的时间，提高了实验效率。

根据本发明的第一方面，本发明提出一种应用于质粒DNA提取的快速沉淀缓冲液，包含：碘化钠；十二烷基肌氨酸钠；脱氧胆酸钠；3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸；乙酸钾；乙酸；以及去离子水。