[发明专利]蛋白酶抑制剂的制备方法

说明书

本发明涉及一种Grp94特异性的Hsp‑90抑制剂，提供一种蛋白酶抑制剂的制备方法，解决现有技术关于该制备方法的空白缺陷，包括以下处理步骤：在三口烧瓶中，放入无水的二甲基甲酰胺，氮气保护下，先加入3,5‑二氯苯硫酚，搅拌完全溶解后，再慢慢加入氢化钠，常温下搅拌反应1小时；然后再边搅拌边加入8‑溴‑9‑(3‑异丙胺基)正丙基腺嘌呤，加完后慢慢升高温度至150度，回流反应6小时；反应完全后冷却到室温，将反应液慢慢加入到水中，淬灭未反应的氢化钠，用二氯甲烷/甲醇混合溶液萃取，有机相再用饱和食盐水和饱和氯化铵溶液多次洗涤，再用饱和碳酸氢钠多次萃取之后，用无水硫酸镁干燥，旋蒸，用柱层析过柱提纯。

技术领域

本发明涉及一种Grp94特异性的Hsp-90抑制剂，尤其涉及一种蛋白酶抑制剂的制备方法。

背景技术

Grp特异性抑制剂是一种很热门的蛋白酶新型抑制剂。Grp(glucose regulatedproteins)即葡萄糖调节蛋白，是一类分布在内质网腔中的应激蛋白，其主要成员为Grp78和Grp94，它们参与蛋白质合成时新生肽链的折叠，行使分子伴侣功能。分子伴侣通过确保蛋白质合成后的适当折叠以及它们在变形应激的条件下重折叠在细胞功能中发挥重要作用，分子伴侣是对应激的细胞反应的重要部分，此外，通过调节各种细胞蛋白质的适当折叠，分子伴侣在调节细胞功能(例如细胞增殖和编程性死亡中)发挥重要的作用。热休克蛋白(Hsp)是一类因对各种环境应激，例如热休克、氧化应激或醇或重金属的存在发生反应而蓄积在细胞中的分子伴侣，除了它们在保护细胞免受所述环境应激中的作用外，在无应激条件下Hsp作为多种细胞蛋白的分子伴侣还可以发挥重要的作用。

Hsp是同一种同源二聚体，其在一系列与多种底物蛋白的复合相互作用中具有ATP酶活性和功能。但是，相对于其它分子伴侣，Hsp-90是独特的，因为其已知底物蛋白中的大多数是信号转导蛋白，因此，Hsp-90在调节细胞信号转导网络中发挥重要作用。特别是，Hsp-90的底物蛋白包括许多与癌症有关的突变蛋白或过度表达的蛋白，例如，p53、Bcr-Abl激酶、Raf-1激酶、Akt激酶、Npm-Alk激酶。因此，Hsp-90的抑制导致这些重要的信号蛋白选择性降解，所述信号蛋白参与细胞编程性死亡、细胞增殖和细胞周期调节。因此，因为这些信号蛋白在涉及异常细胞生长的疾病状态例如癌症中所发挥的重要作用，所以Hsp-90是一种令人注目的治疗靶。因此，发展和开发Hsp-90活性的新抑制剂是合乎需要的。(文献：(a)Patel PD,Yan P,et al；Nat Chem Biol.2013，9(11),677.(b)任景,严碧波等；药学学报,2015,50(6),640.(c)朱江,李慧玉等；肿瘤防治研究,2010,37(12),1442.(d)罗浩铭,孙薇等；药学学报,2010,45(7),813.)。

研究表明，PU-WS13做为一种高效Grp94特异性的Hsp-90抑制剂，能够有效地降低乳腺癌细胞表面HER2的过量表达，并且能强烈抑制人类多发性骨髓瘤细胞在体外环境的活动和生存，是未来很有希望的一种抗癌性新型药物。但目前关于该物质的制备方法甚少。

发明内容

因此，针对以上内容，本发明提供一种蛋白酶抑制剂的制备方法，解决现有技术关于该制备方法的空白缺陷。

为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：蛋白酶抑制剂的制备方法，其特征在于，包括以下处理步骤：

在三口烧瓶中，放入无水的二甲基甲酰胺200ml，氮气保护下，先加入3,5-二氯苯硫酚14～16g，搅拌使其完全溶解后，再慢慢加入氢化钠2～3g，常温下搅拌反应1小时；然后再边搅拌边加入8-溴-9-(3-异丙胺基)正丙基腺嘌呤20～24.5g，加完后慢慢升高温度至150度，回流反应6～7小时；

反应完全后冷却到室温，将反应液慢慢加入到水中，淬灭未反应的氢化钠，用二氯甲烷/甲醇＝10/1混合溶液萃取，有机相再用饱和食盐水和饱和氯化铵溶液多次洗涤，再用饱和碳酸氢钠多次萃取之后，用无水硫酸镁干燥，旋蒸，用柱层析过柱提纯，得到纯品PU-WS13。