[发明专利]一种与猪源喹赛多作用相关的基因CyaR及制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种与猪源喹赛多作用相关的基因CyaR及制备方法和应用，新基因CyaR的全长cDNA通过末端快速扩增法（RACE）获得，其序列为SEQ ID NO.1所示，长505bp；CyaR基因编码一个80个氨基酸的小肽；CyaR基因启动子起点至上游‑148位具有最高的启动子活性，包含了核心启动子序列；在‑148至‑306位之间和‑1301至‑1845位之间含有转录负调控元件。CyaR基因具有促进细胞增殖的作用，可应用于肾细胞、肝细胞、胰岛β‑细胞的快速增殖。

技术领域

本发明属于兽医药理学和分子药理学领域，涉及抗菌促生长剂喹赛多作用有关的猪源新基因CyaR，还涉及该基因的制备方法，基因CyaR可用于促进细胞增殖。

背景技术

喹噁啉-1,4-二氧化物是具有广谱抗菌和促生长双重功效的动物专用药物，自上个世纪70年代以来被广泛应用于养殖业。其代表品种有卡巴氧和喹乙醇，主要作为饲料添加剂用于食品动物。喹赛多是喹噁啉-1,4-二氧化物的一个新品种，保留了喹噁啉-1,4-二氧化物的广谱抗菌和促生长作用，并且具有毒副作用小、安全性高、用药后吸收快、消除迅速、残留期短、无积蓄作用等优点。喹赛多在国内由华中农业大学兽药研究所首次合成，该研究所对其进行了广泛而且深入细致的研究。

喹赛多作为喹噁啉类饲料添加剂，对猪、鸡、鱼等食品动物具有明显的抗菌促生长作用。随着畜、禽、水产养殖业生产效率的进一步提高，动物生长的调控机理逐渐受到研究者的重视。王国永等运用相对定量RT-PCR技术研究喹赛多对猪原代肝细胞中胰岛素样生长因子-I(Insulin-like growth factor,IGF-I)和表皮生长因子(Epidermal growthfactor,EGF)mRNA的影响，结果表明：400ng/mL喹赛多处理猪原代肝细胞12h引起IGF-I和EGF的mRNA水平显著提高，因此推测喹赛多可能是通过对动物体内EGF和IGF-1等生长因子的转录调控而发挥作用(王国永等，2004)。朱惠玲等则从内分泌角度，全面系统的研究了喹赛多促进仔猪生长的作用机制。研究推测喹赛多主要通过两种机制发挥其促生长效应：一是通过提高血液中生长激素(Growth hormone,GH)、胰岛素、性激素、IGF等激素水平，同时降低皮质醇与生长抑素浓度，从而加速体内同化作用，刺激骨骼肌蛋白的合成，并抑制蛋白质的分解；二是通过提高EGF、IGF-1、胰岛素及胃泌素水平，改善胃肠道黏膜的结构与功能，从而促进营养物质的吸收与利用(朱惠玲等，2007)。丁明星等也发现喹赛多可以增加小肠绒毛膜表面积，促进营养物质的吸收(丁明星等，2005)。然而，在喹赛多的作用下具体哪些基因、哪些蛋白发生了什么样的变化，这些变化跟喹赛多的作用是直接相关还是间接相关，这些基因或蛋白的功能是什么，对这些问题的解答可以阐明喹赛多促生长的分子作用机制。

研究组织或细胞在药物等作用下基因表达的差异，进一步克隆差异表达的基因，寻找药物作用靶标，己成为当今分子药理学研究的热点之。基因组由不同基因组成，而每个细胞在特定时期只表达其中的5-15％。这种基因的选择性表达贯穿于机体整个生命过程，基因表达的变化处于控制生物学调节机制的中心位置，反映了机体特定阶段的生命特征。动物受药物等的作用、生物的发育与分化、细胞的周期变化、生物体对外界环境压力的应激反应，以及个体的衰老与死亡，甚至正常的代谢过程变化、病理变化，本质上都是基因表达的改变造成的。因此，比较不同处理组的组织细胞在基因表达上的差异，为我们深入了解药物作用机制打开了方便之门。mRNA差异显示技术自建立以来作为一种鉴定和分析真核细胞mRNA水平基因表达差异的有效方法，得到不断的完善和发展，目前已成为寻找由于药物作用、细胞发育、肿瘤发生等相关的差异基因的简单快速的方法。