[发明专利]一种柱前衍生化分析分离科立内酯二醇对映异构体的方法

权利要求书

1.一种通过柱前衍生分析分离科立内酯二醇对映异构体的HPLC方法，其特征在于，采用多糖衍生物类手性色谱柱，使用正相混合溶剂为流动相的正相色谱法进行分析分离；

所述的柱前衍生所用的衍生化试剂是三苯氯甲烷或1,4-联苯甲酰氯；所制得的科立内酯二醇衍生物分别是三苯氯甲烷衍生物或1,4-联苯甲酰氯衍生物；

所述的分析分离三苯氯甲烷衍生物所用的手性色谱柱填料为硅胶表面涂覆有纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)；所用的流动相为正己烷/异丙醇混合溶剂或正己烷/无水乙醇混合溶剂；所用的正己烷/异丙醇或正己烷/无水乙醇混合溶剂的体积比例为95:5～50:50；柱温15～40℃，流速0.2～～1.5ml/min，检测波长225～235nm；

所述的分析分离1,4-联苯甲酰氯衍生物所用的手性色谱柱填料为硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(s)-α-甲基苯基氨基甲酸酯；所用的流动相为正己烷/无水乙醇混合溶剂；所用的正己烷/无水乙醇混合溶剂的体积比例为80:20，柱温35℃，流速1.0ml/min，检测波长225nm。

2.根据权利要求1所述通过柱前衍生分析分离科立内酯二醇对映异构体的HPLC方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

(1)将科立内酯二醇供试品及对照品分别与衍生化试剂按摩尔比例1:1～1:2溶解到适量吡啶中，恒温0℃～30℃反应1～12h，得反应液；

(2)将反应液与水按体积比为1:5～1:20混合，得混合液；

(3)将混合液用适量乙酸乙脂萃取，分液，浓缩乙酸乙酯层，得到粗品；

(4)将粗品与异丙醚按照质量/体积比1:2～1:10混合，加热搅拌0.5～1h，冷却至室温，过滤，干燥得科立内酯二醇衍生物。