[发明专利]一种柱前衍生化分析分离科立内酯二醇对映异构体的方法

说明书

本发明公开了一种通过柱前衍生分析科立内酯二醇对映异构体的HPLC方法。本发明采用的柱前衍生化，所得科立内酯二醇衍生物分子增加了生色团，提高紫外吸收强度，增加了紫外波长处的可检测性；所得科立内酯二醇衍生物分子极性降低，手性固定相对其选择性增加，提高了其对映异构体的分离度。本发明能够简单、准确、高效分析分离科立内酯二醇对映异构体，进而实现对科立内酯二醇的质量控制。

技术领域

本发明涉及一种高效液相色谱分析分离方法，尤其是通过柱前衍生化分析分离科立内酯二醇对映异构体的方法。

技术背景

前列腺素(Prostaglandins，缩写PGs)是一类重要的具有内源性生理活性的物质，在体内各个组织中广泛存在，是多种生理过程的重要介质。由于在人体中含量极低，临床上前列腺素类药物主要是通过人工合成而来。科立内酯二醇(Corey Lactone Diol)是合成PGF_2α前列腺素药物的关键中间体，分子式为C₈H₁₂O₄，化学名为：六氢-5-羟基-4-羟甲基-2H-环戊并[B]呋喃-2-酮，结构式为：

通常科立内酯二醇化合物分子中含有一对对映异构体，即(3aS,4R,5S,6aR)-六氢-5-羟基-4-羟甲基-2H-环戊并[B]呋喃-2-酮((+)-科立内酯二醇)和(3aR,4S,5R,6aS)-六氢-5-羟基-4-羟甲基-2H-环戊并[B]呋喃-2-酮((-)-科立内酯二醇)，二者互为对映异构体杂质在后续合成中继续参与反应，进而形成多种对应杂质，难以分析分离和去除，严重影响前列腺素类药物的质量。

在众多分析分离光学异构体的方法中，应用手性固定相的液相色谱法较为常见。但科立内酯二醇分子极性较强，且紫外吸收较弱，直接应用手性固定相的液相色谱分析分离科立内酯二醇较为困难。

因此，如何建立一种能够简单、高效的分析分离科立内酯二醇对映异构体的方法，进而实现对其质量的控制，是目前需要解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供了一种采用柱前衍生的方法，使其能够应用手性固定相的液相色谱法进行分析，进而实现对科立内酯二醇的质量控制。

本发明提供一种通过柱前衍生分析分离科立内酯二醇对映异构体的HPLC方法，采用多糖衍生物类手性色谱柱，使用正相混合溶剂为流动相的正相色谱法进行分析分离。

本发明所述的柱前衍生分析分离科立内酯二醇对映异构体的方法，所使用的衍生化试剂为三苯氯甲烷、苯甲酰氯或1,4-联苯甲酰氯。

进一步地，柱前衍生科立内酯二醇对映异构体的方法，包括以下步骤：

(1)将科立内酯二醇供试品及其对照品分别与衍生化试剂按摩尔比例1:1～1:2溶解到适量吡啶中，恒温0℃～30℃反应1～12h，得反应液；

(2)将反应液与水按体积比为1:5～1:20混合，得混合液；

(3)将混合液用适量乙酸乙脂萃取，分液，浓缩乙酸乙酯层，得到粗品；

(4)将粗品与异丙醚按照质量/体积比为1:2～1:10混合，加热搅拌0.5～1h，冷却至室温，过滤，干燥制得科立内酯二醇衍生物供试品及其对照品。

进一步地，本发明所述的柱前衍生科立内酯二醇对映异构体的方法，所制得的科立内酯二醇衍生物是三苯氯甲烷衍生物、苯甲酰氯衍生物或1,4-联苯甲酰氯衍生物，其结构式分别如下：