[发明专利]一种检测MiRNA的生物传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种检测MiRNA的生物传感器的制备方法，其特征在于，由以下步骤制备而成：

（1）使用发夹2制备银纳米簇AgNCs；

（2）体系在均相反应溶液中混合反应；

所述发夹2的序列如SEQ ID NO:4所示；

所述的银纳米簇AgNCs的制备操作步骤如下：

1）配置浓度为20mM PB缓冲溶液；

2）配制1mL浓度为2mM 的AgNO₃；

3）取1ml的离心管，加入20mM 76μl的PB，加入15μl 100μM发夹2，加入4.5μl的2mMAgNO_3，震荡1min，放于4℃冰箱15-30min；

4）在步骤3）反应期间用0℃冰水配制NaBH₄溶液，其浓度为2mM，体积为1mL；

5）从冰箱中取出步骤3）溶液后，加入2mM 4.5μl NaBH₄，震荡1min，放在4℃冰箱4h以上；

6）取30ul制备好的AgNCs于离心管中，加入120ul超纯水混匀，用移液枪取150ul溶液于微量比色皿中，使用荧光分析仪对其进行扫描，使用激发光560nm，测得其发射峰在650nm，证明成功合成AgNCs；

所述的均相溶液中反应过程的主要步骤如下：

反应分为A、B两个体系，

A体系包含

2μL的MiRNA；

2μL 10nM模板链Template；

2μL10×phi29的buffer；

2μL1000mM氯化钾；

12μL的DEPC水；

共20μL；

B体系包含

2μL 40U/μL的RNA酶抑制剂；

1μL 250μM的dNTPs；

1μL Nt.AlWI；

2μL 0.4U/μL的phi29；

将2μL 15μM的发夹1加入到B体系中，之后再加入2μL 15μM已合成好银簇的发夹2，使得B体系共10μL；将A体系在90℃条件下温育10min,然后从90℃逐渐冷却至37℃；其后，将A部分和B部分混合，在37℃水浴下温育1h；A和B体系共30μL，然后补加120μL的水混匀后，使用荧光仪检测荧光；

所述MiRNA序列如SEQ ID NO:1所示；

所述Template序列如SEQ ID NO:2所示；

所述发夹1序列如SEQ ID NO:3所示。