[发明专利]一种检测MiRNA的生物传感器及其制备方法

说明书

本发明涉及生物传感器技术领域，特别涉及检测检测MiRNA的生物传感器。本发明采用将银簇荧光增强与链置换循环放大相结合，均相反应混合液的方法进行制备。具体制备方法：使用发夹2合成银簇；在均相溶液中进行目标物MiRNA与模板链Template的结合进而产生Trigger的链置换以及后续发夹1的打开和发夹2的打开，发夹1增强发夹2的银簇荧光。利用了目标物与模板链Template的结合产生Trigger以及后续Trigger的循环放大对目标物MiRNA的高特异性检测；利用链置换，实现了Trigger的循环利用，起到了信号放大的作用。解决了现有技术中的方法特异性和灵敏度都比较低、成本高的问题。

技术领域

本发明涉及生物传感器技术领域，特别涉及基于富含G的序列能使银簇荧光增强来检测miRNA的生物传感器，还涉及银簇制备方法。

背景技术

MicroRNAs（miRNAs）是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其大小长约20~25个核苷酸。越来越多的证据显示，miRNA表达与多种癌症相关，大约50%得到注解的miRNAs在基因组上定位于与肿瘤相关的脆性位点（fragile site），miRNA的表达量水平变化包括两种，上调和下调，与相关癌症的类型和阶段相关。上调的 miRNA通过抑制抑癌基因致使癌变，被认为是致癌的miRNA；而下调的miRNA，通常防止癌症的发展，通过抑制原癌基因的表达量，已知为肿瘤抑癌miRNA。因此，miRNA 已成为用于癌症的预后、诊断和治疗的生物标志物。miR-122是科学家较早发现且研究全面的一种miRNA。miRNA-122在肝脏中高度表达，miRNA-122水平的降低和肝癌细胞有关，且在调节丙型肝炎病毒的复制方面也有重要的作用。

目前报道的MiRNA的检测方法主要有定量逆转录-聚合酶链式反应（qRT—PCR）和Northern blotting 法、克隆测序法等，但PCR对温度和仪器要求较高，Northern blotting法耗时、过程复杂、低灵敏性，克隆测序法也是耗时耗力。因此，目前急需建立一种快速，准确，灵敏且高特异性的检测方法来检测miRNA-122。

发明内容

为了解决以上现有技术中检测miRNA-122的方法中特异性和灵敏度都比较低、成本高、检测周期长的问题，本发明提供了一种特异性和灵敏度高、成本低、检测速度快的基于链置换的富含G的序列能使银簇荧光增强的生物传感器以及涉及银簇制备方法。

本发明还提供了基于链置换的富含G的序列使银簇荧光增强的生物传感器的制备方法。

本发明是通过以下步骤得到的：

本发明中一共用到了4条DNA链，其序列分别是：

MiRNA-122

5’-UGGAGUGUGACAAUGGUGUUUG-3’（SEQ ID NO:1）；

模板DNA链Template

5’-CCT TCT CGT CGC ACT GTC GCA CTC AG C TCT GAT C CA AAC ACC ATT GTCACA CTC CA CTCTGATC CAAACACCATTGTCACACTCCA --3’ （SEQ ID NO:2）；

发夹1： 5’—TGG GGT GGG TGG GTG GGG TTT TTT GCG ACA GTG CAC ATT CATATT TCA CCC TTC TCG TCG CAC TGT CGC ACT CAG--3’ （SEQ ID NO:3）；

发夹2：