[发明专利]CTCF陷阱蛋白在制备抗葡萄膜黑色素瘤药物中的应用

权利要求书

1.一种CTCF陷阱蛋白，其特征在于，所述的CTCF陷阱蛋白是一种人工表达的重组蛋白，它去除了野生型CTCF的N端和C端功能区，保留其锌指结构并添加DNA甲基化酶Sss1；

所述的CTCF陷阱蛋白的氨基酸序列为MVPKKKRKVEDKVGNMKPPKPTKIKKKGVKKTFQCELCSYTCPRRSNLDRHMKSHTDERPHKCHLCGRAFRTVTLLRNHLNTHTGTRPHKCPDCDMAFVTSGELVRHRRYKHTHEKPFKCSMCDYASVEVSKLKRHIRSHTGERPFQCSLCSYASRDTYKLKRHMRTHSGEKPYECYICHARFTQSGTMKMHILQKHTENVAKFHCPHCDTVIARKSDLGVHLRKQHSYIEQGKKCRYCDAVFHERYALIQHQKSHKNEKRFKCDQCDYACRQERHMIMHKRTHTGEKPYACSHCDKTFRQKQLLDMHFKRYHDPNFVPAAFVCSKCGKTFTRRNTMARHADNCAGPDGVEGENGFEGSGGGGSGGGGSGGGLGSTLEMSKVENKTKKLRVFEAFAGIGAQRKALEKVRKDEYEIVGLAEWYVPAIVMYQAIHNNFHTKLEYKSVSREEMIDYLENKTLSWNSKNPVSNGYWKRKKDDELKIIYNAIKLSEKEGNIFDIRDLYKRTLKNIDLLTYSFPCQDLSQQGIQKGMKRGSGTRSGLLWEIERALDSTEKNDLPKYLLMENVGALLHKKNEEELNQWKQKLESLGYQNSIEVLNAADFGSSQARRRVFMISTLNEFVELPKGDKKPKSIKKVLNKIVSEKDILNNLLKYNLTEFKKTKSNINKASLIGYSKFNSEGYVYDPEFTGPTLTASGANSRIKIKDGSNIRKMNSDETFLYIGFDSQDGKRVNEIEFLTENQKIFVCGNSISVEVLEAIIDKIGG。

2.如权利要求1所述的CTCF陷阱蛋白在制备抗葡萄膜黑色素瘤药物中的应用。

3.一种包含权利要求1所述的CTCF陷阱蛋白的慢病毒在制备抗葡萄膜黑色素瘤药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的一种包含CTCF陷阱蛋白的慢病毒在制备抗葡萄膜黑色素瘤药物中的应用，其特征在于，所述包含CTCF陷阱蛋白的慢病毒的制备方法如下：293T细胞计数，取4-8*10⁶个细胞转入10cm培养皿，加入无血清DMEM培养基至10ml；取转染试剂Lipo200030μl与无血清DMEM 500μl混合，室温静置5min；另取500μl无血清DMEM，加入CTCF陷阱蛋白质粒3μg，包装质粒PM 3μg，包装质粒PS 6μg，混匀；将上述两管液体混合，室温静置20min；静置后将液体加入上述10cm皿中，混匀后37℃，5％CO₂培养；5小时后换液，弃上清，加入含10％胎牛血清的DMEM 10ml，继续37℃，5％CO₂培养；48小时收上清，加入含10％胎牛血清的DMEM 10ml，继续37℃，5％CO₂培养；72小时再次收上清；取两次收取的上清，4000rpm，4℃，离心20min；用5ml注射器将慢病毒用滤器过滤后加入透析管，3500rpm离心30min，分装后-80度保存。