[发明专利]一种基于DTNB标记的金@银核壳纳米棒的真菌毒素检测方法

说明书

一种基于DTNB标记的金@银核壳纳米棒的真菌毒素超灵敏检测方法，属于食品安全、环境监测等技术领域。本发明通过种子生长法制得金纳米棒，5,5'‑二硫代双(2‑硝基苯甲酸)(DTNB)标记于金纳米棒上，同时，在金纳米棒外包覆银壳层，制得金@DTNB@银表面拉曼增强基底，制备超顺磁性的磁性材料壳聚糖四氧化三铁，在制得的拉曼增强基底上偶联真菌毒素适配体互补链，磁性材料上偶联真菌毒素适配体链，当检测体系中没有真菌毒素存在时，增强剂和磁性材料会结合在一起，体系的拉曼信号最强，当真菌毒素存在时，适配体修饰的磁性材料会特异性的优先和真菌毒素结合，经外界磁场分离后体系的拉曼信号改变，从而达到真菌毒素定量检测的目的。

技术领域

本发明涉及到方法适用于食品安全、环境监测等技术领域，尤其涉及到一种基于DTNB标记的金@银核壳纳米棒的真菌毒素检测方法。

背景技术

真菌毒素是玉米、花生等谷物食品中常见的微生物毒素，是真菌在食品或饲料里生长所产生的有毒次级代谢产物，具有潜在的致肝癌、胃癌、肾癌、肠癌的可能性。目前常规的用于真菌毒素的检测方法，主要有生物鉴定法，但此方法只能用于定性检测，专一性不强，灵敏度低；化学分析法(薄层层析法)，精密度差，难以在实际中应用；仪器法(气相色谱法、液相色谱法、气质联用法、液质联用法)，但前处理复杂，仪器昂贵；免疫分析法(酶联免疫吸附法，免疫荧光技术，放射免疫测定法等)，但此方法存在一定的假阳性。所以急需建立一种灵敏度高、稳定性强、操作简单的真菌毒素定量检测方法。

当一束光入射到一个物体时，会产生入射光、透射光和反射光，反射光又分为弹性散射和非弹性散射，其中频率发生改变的非弹性散射即为拉曼散射，而表面增强拉曼散射是拉曼散射的延伸和发展。能够产生表面增强拉曼光谱效应的有单金属增强基底金、银、铜和一些过渡金属，其中以金和银的增强效果最为显著，近年来一些课题组将单金属与二氧化硅、四氧化三铁、石墨烯等组装在一起，组成具有特定化学特性和拉曼特性的核壳形增强基底。表面增强拉曼效应的强弱与增强基底的种类、形貌和结构都有很大的关系。因此，构建形状、尺寸合适的增强基底和检测体系对实现真菌毒素的快速、灵敏检测非常重要。

与单金属增强基底相比，核壳形的双金属增强基底表面增强拉曼光谱效应更显著。金纳米棒和其它形貌的金纳米颗粒相比具有更好的等离子增强效应，银具有最好的等离子增强效应，作为金纳米棒的外壳，显著提高纳米棒的拉曼增强效果。DTNB作为一种没有荧光干扰和具有大散射截面的分子，作为拉曼信号分子标记于金银纳米棒壳层中间，能显著提高拉曼信号的稳定性。适配体的特异性和磁性材料的分离聚集作用可以拉近增强基底和待测物距离，提高拉曼信号。因此本专利制备了真菌毒素适配体互补链修饰的DTNB标记的金@DTNB@银核壳纳米棒和真菌毒素适配体修饰的壳聚糖四氧化三铁(CS-Fe₃O₄)磁珠，构建了三明治结构的检测体系，大大提高了拉曼信号的强度和稳定性，成功应用于真菌毒素的超灵敏定量检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于DTNB标记的金@银核壳纳米棒的真菌毒素检测方法，该方法对真菌毒素的检测稳定性好，灵敏度高。

为了实现上述目的，本发明的技术方案包括：真菌毒素适配体互补链修饰的金@DTNB@银核壳纳米棒的制备，真菌毒素适配体修饰的壳聚糖四氧化三铁的磁珠的制备，真菌毒素表面增强拉曼光谱检测体系的构建及标准曲线的建立；该方法适用于食品安全、环境监测等技术领域。

上述的一种基于DTNB标记的金@银核壳纳米棒的真菌毒素超灵敏检测方法，在合成的金纳米棒@DTNB外包覆银壳层，通过优化加入硝酸银的量，最终根据金@DTNB@银核壳纳米棒的拉曼信号的强度确定最佳的硝酸银加入量，当每6mL金纳米棒的CTAB溶液中加入30μL，10mM的硝酸银时获得最强的拉曼信号。