[发明专利]耐除草剂大豆SHZD32‑1及其衍生品种的实时荧光定性PCR检测方法在审
申请号: | 201710119878.0 | 申请日: | 2017-03-01 |
公开(公告)号: | CN106636445A | 公开(公告)日: | 2017-05-10 |
发明(设计)人: | 徐俊锋;汪小福;陈笑芸;魏巍;徐晓丽;彭城 | 申请(专利权)人: | 浙江省农业科学院 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/11 |
代理公司: | 北京思元知识产权代理事务所(普通合伙)11598 | 代理人: | 余光军,霍雪梅 |
地址: | 310021 浙江省杭*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 除草剂 大豆 shzd32 及其 衍生 品种 实时 荧光 定性 pcr 检测 方法 | ||
技术领域
本发明涉及耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的定性PCR检测方法,尤其涉及耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的实时荧光定性PCR检测方法,属于耐除草剂大豆的定性检测领域。
背景技术
随着基因工程技术的飞速发展,转基因作物种植面积和转基因作物品种都大量增加,同时转基因植物及其产品安全性也引起全球范围内的关注和担忧。为了有效监管转基因植物及其产品,保障消费者的合法权益,目前,包括中国在内的全世界50多个国家颁布并实施了转基因生物安全标识制度和配套的管理规定。中国的基因工程育种技术发展迅速,近年来育成了一系列的转基因品种作物,因此制定相关的转基因生物安全评价方法显得尤其重要。
在转基因作物及其产品安全检测方法中,PCR技术以其灵敏度高、稳定性好、准确性强、操作简便成为国际上转基因植物及其产品检测的主要方法,中国近年来颁布的转基因生物及其产品安全评价方法也是以PCR检测方法为主。根据检测目的基因的不同,PCR检测方法分为筛查、基因特异性、构建特异性和转化体特异性检测;其中,转化体特异性检测方法的特异性最高,筛查检测和转化体特异性检测方法是实际检测中应用最广泛的方法。筛查检测方法主要用于初步检测样品中是否含有转基因成分,转化体特异性检测方法可以准确确定转基因植物的身份。
转基因耐草甘膦大豆SHZD32-1由上海交通大学研发,利用农杆菌介导法将密码子经优化的耐草甘膦基因G10-EPSPS导入了栽培大豆品种“中豆32”获得转G10-EPSPS基因的耐草甘膦大豆SHZD32-1。G10是一个新的5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)基因。温室试验和中间试验表明,转G10基因耐草甘膦大豆的耐草甘膦性能良好,能够达到耐除草剂的运用水平,已经获批进行环境试验。到目前为止,中国尚未发布专门针对耐草甘膦大豆SHZD32-1及其衍生品种检测的方法。因此,迫切需要尽快制定相关检测方法,为中国转基因生物安全管理部门实施各项安全管理制度提供科学方法和技术支撑。
发明内容
本发明所要解决的第一个技术问题是提供用于检测耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的实时荧光定性PCR检测引物对和探针;
本发明所要解决的第二个技术问题是建立一种耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的实时荧光定性PCR检测方法。
为解决上述技术问题,本发明所采取的技术方案是:
本发明根据耐除草剂大豆SHZD32-1的两端侧翼序列,分别在两端设计了引物和探针。本发明所设计的实时荧光定性PCR检测引物对和探针的核苷酸序列如下:
右侧的引物为由核苷酸序列为SEQ ID No.1所示的正向引物和SEQ ID No.2所示的反向引物组成的引物对1;所述探针为核苷酸序列为SEQ ID No.3所示的探针1;
左侧的引物为由核苷酸序列为SEQ ID No.4所示的正向引物和SEQ ID No.5所示的反向引物组成的引物对2;所述探针为核苷酸序列为SEQ ID No.6所示的探针2。
本发明进一步分别利用这两端的引物和探针扩增SHZD32-1大豆基因组DNA,对两侧设计得到的引物做标准曲线验证引物工作效率,筛选最佳的引物和探针组合。扩增结果证明,右侧的引物与探针明显优于左侧的引物和探针。本发明将右侧的引物与探针分别命名为SHZD32-1QF(SEQ ID No.1所示)、SHZD32-1QR(SEQ ID No.2所示)、SHZD32-1P(SEQ ID No.3所示)。
本发明所述的实时荧光定性PCR检测引物对和探针能够应用于检测耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种。
本发明进一步公开了一种耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的实时荧光定性PCR检测方法,包括以下步骤:(1)提取待检测大豆样品的DNA;(2)以提取的DNA为模板,以本发明所述的实时荧光定性PCR检测引物对和探针建立PCR扩增体系并进行实时荧光PCR扩增;(3)如果发生特异性扩增(即从待检测样品中扩增获得典型的扩增曲线),则待检测的大豆样品是耐除草剂大豆SHZD32-1或其衍生品种;如果未发生特异性扩增(即从待检测样品中未能扩增出典型的扩增曲线),则待检测的大豆样品不是耐除草剂大豆SHZD32-1或其衍生品种。
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