[发明专利]多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用

权利要求书

1.多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述多酚氧化酶是茶多酚氧化酶、苹果多酚氧化酶、血浆铜蓝蛋白中的一种，所述抗肿瘤药物含有最少一种所述多酚氧化酶。

2.根据权利要求1所述多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物含有茶多酚氧化酶，所述茶多酚氧化酶的制备方法如下：称取-4℃茶鲜叶25重量份，放入组织捣碎机内，加聚乙烯吡咯烷酮50重量份，再加入4℃的pH为5.6的柠檬酸-磷酸盐缓冲液200体积份，启动组织捣碎机进行捣碎作业3min，关闭组织捣碎机并休息5min，再开启组织捣碎机进行捣碎作业2min，将组织捣碎机中的混合物利用四层纱布抽滤得到第一滤液和滤渣，将滤渣放入研钵中，加入25重量份的石英砂以及pH为5.6的柠檬酸-磷酸盐缓冲液25体积份于冰浴中研磨5min，利用尼龙布过滤得到第二滤液，把第一滤液和第二滤液合并放入离心机中进行离心10min，离心机的转速为4000rpm，离心机中的上清液即为茶多酚氧化酶粗酶液；茶多酚氧化酶粗酶液利用硫酸铵进行盐析、DEAE-Sepbarose阴离子交换层析，最终得到电泳纯的茶多酚氧化酶。

3.根据权利要求1所述多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物含有苹果多酚氧化酶，所述苹果多酚氧化酶的制备方法为：将苹果洗净后在4℃保温，再将4℃的苹果去皮后取果肉200重量份加到组织捣碎机中，往组织捣碎机中加入500体积份-20℃的丙酮，组织捣碎机匀浆作业2min；将组织捣碎机中的混合物用布氏漏斗抽滤得到滤饼，滤饼用200体积份-20℃的丙酮再次提取抽滤得到白色粉末，白色粉末冷冻真空干燥即得PPO丙酮粉；将0.5重量份PPO丙酮粉溶于250体积份浓度为0.05mol/L且pH为6.8的磷酸盐缓冲溶液中，磷酸盐缓冲溶液的温度为4℃，用磁力搅拌器搅拌磷酸盐缓冲溶液20min得到混合液，将混合液倒入离心机中进行离心作业，离心机转速为5000r/min，离心作业10min后，离心机中的上清液即为苹果多酚氧化酶粗酶液；所述苹果多酚氧化酶粗酶液经过硫酸铵盐析、DEAE Fast Flow柱层析分离后，得到电泳纯的苹果多酚氧化酶。

4.根据权利要求1所述多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物含有血浆铜蓝蛋白，所述血浆铜蓝蛋白的制备方法为：将500体积份的0℃的人血清倒入离心机中，在4℃且转速为6000rpm下离心15min后取上清液X，将取出的上清液X倒入容器中，在往容器中倒入与上清液X同等体积的浓度为0.05mol/L且pH为6.5的磷酸盐缓冲液，在容器中使用磁力搅拌器搅拌，在搅拌过程中还加入250体积份0℃的正丁醇；正丁醇加完后，关闭磁力搅拌器，容器中的物料在4℃下静止30min，再将容器中的物料倒入离心机中，在4℃且转速为8000rpm下离心30min后取上清液Y，上清液Y经过灭菌纱布过滤得脱脂血清；脱脂血清经过硫酸铵盐析、DEAE Fast Flow柱层析分离后，获得电泳纯的血浆铜蓝蛋白。

5.根据权利要求1所述多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物用于治疗包括宫颈癌、肝癌、肺癌、结肠癌、胃癌。

6.根据权利要求1所述多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物还含有紫杉醇和华蟾素。

7.根据权利要求1所述多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用，其特征在于，用所述多酚氧化酶制备抗肿瘤药物时，先使用甲氧基聚乙二醇对所述多酚氧化酶进行表面修饰。