[发明专利]多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药及应用领域，尤其涉及多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用。

背景技术

肿瘤尤其是恶性肿瘤是病患者死亡率极高的恶性疾病，其治疗难度极大。20世纪后期近30年以来肿瘤的发病率一直呈趋势，目前世界癌症发病率和死亡率比1990年上升了22%，今后20年还将大约上升50%。到2020年，全球每年新增癌症患者人数将达到1500万，并有1000万人死于癌症，且其中大部分将发生在发展中国家。我国肿瘤引起的死亡率在所有病因中占17.9%，居第二位，且发病率呈上升趋势。目前我国每年癌症的发病人数约为200万，死于癌症的人数超过140万。长期以来，国际社会花费巨资用于研究治疗癌症的新药和方法。世界制药公司研究开发抗肿瘤新药也不遗余力，抗肿瘤的新技术和新方法随之不断涌现。目前治疗肿瘤的方法可分为：外科治疗、放射治疗、化学治疗、药物治疗和综合治疗等。长期大量的临床表明，外科手术适用于某些局部肿瘤的早期和中期治疗，但多数人靠手术治疗不能防止肿瘤的复发和转移。放疗和化疗虽然有较高的治愈率，但是常引起如骨髓抑制、免疫低下等毒副作用，是的患者难以坚持治疗。而且，化疗药物在治疗过程中出现的耐药性，也成为目前临床治疗的难题之一。而且各种治疗方法所带来的和患者生存质量的下降问题使如何保护机体以及各个器官的功能，提高人的生活质量也日益成为广泛重视的课题。由于上述的各种原因，使世界上许多国家把研究重心移向药物治疗和新药研发方面。

申请人发现多酚氧化酶在抑制肿瘤细胞增殖及治疗实验性肿瘤方面具有令人满意的效果，更令人满意的是该多酚氧化酶在抗肿瘤的同时，没有明显的毒副作用。

发明内容

本发明针对现有技术存在的不足，提供了多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用，具体技术方案如下：

多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用，所述多酚氧化酶是茶多酚氧化酶、苹果多酚氧化酶、血浆铜蓝蛋白中的一种，所述抗肿瘤药物含有最少一种所述多酚氧化酶。也就是说，所述茶多酚氧化酶、苹果多酚氧化酶、血浆铜蓝蛋白中的任一种或任两种以上的组合为所述抗肿瘤药物的主要活性成分。

作为上述技术方案的改进，所述抗肿瘤药物含有茶多酚氧化酶，所述茶多酚氧化酶的制备方法如下：称取-4℃茶鲜叶25重量份，放入组织捣碎机内，加聚乙烯吡咯烷酮50重量份，再加入4℃的pH为5.6的柠檬酸-磷酸盐缓冲液200体积份，启动组织捣碎机进行捣碎作业3min，关闭组织捣碎机并休息5min，再开启组织捣碎机进行捣碎作业2min，将组织捣碎机中的混合物利用四层纱布抽滤得到第一滤液和滤渣，将滤渣放入研钵中，加入25重量份的石英砂以及pH为5.6的柠檬酸-磷酸盐缓冲液25体积份于冰浴中研磨5min，利用尼龙布过滤得到第二滤液，把第一滤液和第二滤液合并放入离心机中进行离心10min，离心机的转速为4000rpm，离心机中的上清液即为茶多酚氧化酶粗酶液；茶多酚氧化酶粗酶液利用硫酸铵进行盐析、DEAE-Sepbarose阴离子交换层析，最终得到电泳纯的茶多酚氧化酶。

作为上述技术方案的改进，所述抗肿瘤药物含有苹果多酚氧化酶，所述苹果多酚氧化酶的制备方法为：将苹果洗净后在4℃保温，再将4℃的苹果去皮后取果肉200重量份加到组织捣碎机中，往组织捣碎机中加入500体积份-20℃的丙酮，组织捣碎机匀浆作业2min；将组织捣碎机中的混合物用布氏漏斗抽滤得到滤饼，滤饼用200体积份-20℃的丙酮再次提取抽滤得到白色粉末，白色粉末冷冻真空干燥即得PPO丙酮粉；将0.5重量份PPO丙酮粉溶于250体积份浓度为0.05mol/L且pH为6.8的磷酸盐缓冲溶液中，磷酸盐缓冲溶液的温度为4℃，用磁力搅拌器搅拌磷酸盐缓冲溶液20min得到混合液，将混合液倒入离心机中进行离心作业，离心机转速为5000r/min，离心作业10min后，离心机中的上清液即为苹果多酚氧化酶粗酶液；所述苹果多酚氧化酶粗酶液经过硫酸铵盐析、DEAE Fast Flow柱层析分离后，得到电泳纯的苹果多酚氧化酶。