[发明专利]高纯度液体剂型葡萄糖异构酶的生产方法

权利要求书

1.高纯度液体剂型葡萄糖异构酶的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、活化接种：将链霉菌活化后，接入培养瓶中培养，得到种母液；

B、连续培养：将种母液依次在180-220转/分，30-35℃下培养24-28小时，在180-220转/分，30-35℃下培养18-36小时，在150-180转/分，30-35℃下培养18-36小时，得到培养液；

C、发酵培养：将培养液在110-150转/分，30-35℃下培养40-55小时，得到发酵液；

D、处理发酵液：将发酵液经过过滤处理后取滤液，得到含有葡萄糖异构酶的液体制剂；

所述链霉菌为M1033链霉菌；

步骤A中，从零下80-零下85℃的冻干管中取出链霉菌，在30-35℃下斜面活化48-72小时后，接入培养瓶中培养；所述培养瓶为摇瓶；步骤B中，将种母液依次在180-220转/分，30-35℃下在摇瓶中培养24-28小时，然后在180-220转/分，30-35℃下在一级种子罐中培养18-36小时，在150-180转/分，30-35℃下在二级种子罐中培养18-36小时，得到培养液；步骤C中，在发酵罐中进行发酵培养；连续培养和发酵培养均在无菌环境中进行；

步骤D中的过滤处理为：向发酵液中添加防腐剂、硅藻土、膨润土和纯净水，在15-30℃下搅拌15-30分钟后，静置1-3小时，再依次进行过滤除渣、微滤除菌和超滤浓缩；所述硅藻土、膨润土和纯净水相对发酵液的重量百分比分别为1-3％、1-5％和50-150％；板框过滤、微滤和超滤的过滤压力分别为0.05-0.25MPa，0.15-0.35MPa和0.30-0.50MPa；

步骤D中，超滤浓缩处理后，还有防腐稳定处理：向浓缩液中加入食盐、醋酸钠、甘油、硫酸镁和氯化钴，食盐、醋酸钠、甘油、硫酸镁和氯化钴相对最终液体制剂的体积百分比分别为15-20％，5-10％，2-5％，0.1-0.2％和0.05-0.1％；经过防腐稳定处理后，还需经过检验步骤，检验合格后，灌装入库；检验的标准为：含有葡萄糖异构酶的液体制剂的酶活大于等于5000u/ml。