[发明专利]高纯度液体剂型葡萄糖异构酶的生产方法

说明书

本发明涉及一种高纯度液体剂型葡萄糖异构酶的生产方法，包括以下步骤：活化接种、连续培养、发酵培养和处理发酵液，最终得到含有葡萄糖异构酶的液体制剂，具有活力高、耐温、酶活稳定性好的优点，应用于果葡糖浆行业，适合间歇生产F42型果葡糖浆，同时也可使用该葡萄糖异构酶一步法生产F55型果葡糖浆。生产F42型果葡糖浆时该产品对葡萄糖浆质量标准要求较低；一次购酶花费少；操作简单，随加随生产，不需维护和考虑酶活，完全实现该酶国产且生产灵活性高。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种高纯度液体剂型葡萄糖异构酶的生产方法。

背景技术

传统葡萄糖异构酶生产考虑到发酵酶活力偏低，葡萄糖异构酶在液体剂型时稳定性差等因素，通常把发酵结束时的发酵液通过化工产品进行交联固定酶活，烘干后得到固定化葡萄糖异构酶，其剂型为固体，目前仅有国外丹麦诺维信、美国杜邦公司供应。固定化葡萄糖异构酶使用时，必须花费几十万上百万一次购买大量装柱后方可使用，且使用要求葡萄糖液必须精制达标方可生产果葡糖浆，且生产也要求连续，葡萄糖液质量不达标、间歇生产或使用维护不当，均会导致失效甚至报废，造成生产巨大损失。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种高纯度液体剂型葡萄糖异构酶的生产方法，使用所述生产方法生产得到的葡萄糖异构酶，具有活力高、耐温、酶活稳定性好的优点，应用于果葡糖浆行业，适合间歇生产F42型果葡糖浆，同时也可使用该葡萄糖异构酶一步法生产F55型果葡糖浆。生产F42型果葡糖浆时该产品对葡萄糖浆质量标准要求较低；一次购酶花费少；操作简单，随加随生产，不需维护和考虑酶活，完全实现该酶国产且生产灵活性高。

本发明采用的技术方案是：高纯度液体剂型葡萄糖异构酶的生产方法，包括以下步骤：

A、活化接种：将链霉菌活化后，接入培养瓶中培养，得到种母液；

B、连续培养：将种母液依次在180-220转/分，30-35℃下培养24-28小时，在180-220转/分，30-35℃下培养18-36小时，在150-180转/分，30-35℃下培养18-36小时，得到培养液；

C、发酵培养：将培养液在110-150转/分，30-35℃下培养40-55小时，得到发酵液；

D、处理发酵液：将发酵液经过过滤处理后取滤液，得到含有葡萄糖异构酶的液体制剂。

使用所述生产方法生产得到的葡萄糖异构酶，具有活力高、耐温、酶活稳定性好的优点。

本发明使用的培养基为：蔗糖7％、蛋白胨3％、牛肉粉1.5％、麸皮1％、玉米浆0.5％、硫酸铵0.5％、硫酸镁0.05％、氯化钴0.05％、磷酸氢二钾0.02％、磷酸二氢钾0.01％，余量为纯净水。

优选的，培养基为蔗糖10％、蛋白胨1.5％、牛肉粉2.0％、麸皮0.8％、玉米浆1.0％、硫酸铵0.35％、硫酸镁0.08％、氯化钴0.05％、磷酸氢二钾0.02％、磷酸二氢钾0.01％，余量为纯净水。

为了进一步提高得到的液体制剂中的葡萄糖异构酶的含量及酶活，优选的技术方案是，所述链霉菌为M1033链霉菌。所述M1033链霉菌是本申请的发明人经过反复试验确定的，相较普通的链霉菌，在发酵后得到的液体制剂中的葡萄糖异构酶的含量及酶活耐温性都较高。

为了进一步提高链霉菌活化效率，优选的技术方案是，步骤A中，从零下80-零下85℃的冻干管中取出链霉菌，在30-35℃下查氏斜面活化48-72小时后，接入培养瓶中培养。