[发明专利]一种高纯度奥利万星关键中间体A82846B的制备方法

说明书

本发明提供了一种高纯度奥利万星关键中间体A82846B的制备方法，具体通过将奥利万星关键中间体A82846B从发酵液中分离后，先进行调节pH，然后通过大孔吸附树脂纯化，再通过反相色谱纯化，最后通过结晶，得到高纯度的A82846B。本发明采用的方法，操作简单，有机溶剂用量少，大大减少了废液的产生；并且克服了现有技术中阳离子大孔吸附树脂吸附效率低，漏吸附导致产品收率降低的缺陷，适合工业化生产。

技术领域

本发明属于工业微生物技术领域，更具体的涉及一种高纯度奥利万星关键中间体A82846B的制备方法。

背景技术

糖肽抗生素是由微生物产生，或由微生物产生并进行部分修饰的一大类物质。在上世纪九十年代发现的糖肽中，包括称作A82846A（也称作ereomomycin）、A82846B（也称作氯东方霉素chloroorienticinA）、A82846C（也称作东方霉素orienticinC）及东方霉素A。已经对天然存在的糖肽进行了多种修饰，其中一种是对糖肽中的反应性胺的还原烷基化的修饰。奥利万星(Oritavancin)，是在第一代糖肽抗生素万古霉素的基础上开发的第二代糖肽抗生素，其作用机制是通过阻断肽聚糖生物合成时转糖苷作用抑制细菌细胞壁的形成。故该类化合物对细菌细胞具有高度的特异性，能迅速杀灭细菌而对人体正常细胞影响较小，因而疗效好，安全性高。

2014年8月，FDA批准奥利万星用于由敏感革兰氏阳性菌导致的急性细菌性皮肤和皮肤结构感染成人患者的治疗。奥利万星是一种单剂量治疗方案的抗生素，具有良好的市场前景。

A82846B，是合成奥利万星的关键中间体，可由东方诺卡菌(Nocardiaorientalis)发酵产生。除A82846B外，东方诺卡菌发酵时还会产生两种主要成分A82846A和A82846C，它们的结构式如下：

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由式可知，三种物质结构非常接近，分离纯化工作比较困难。目前，关于奥利万星关键中间体A82846B提取分离的文献报道较少。欧洲专利EP0280570A2及美国专利US4845194公开了三种物质的分离方法，其中A82846B的分离方法为：将发酵液通过阳离子（NH₄⁺）交换树脂进行初步富集，然后通过制备性高效液相色谱柱分离，最后经过HP20ss树脂精制。专利中主要进行了此3步纯化，后面的两个步骤的收率仅为29%，总收率更低。

CN87106483A也公开了一种A82846的回收方法，包括将其吸附于阳离子交换树脂上，如Dowex XF5-43278，Dowex-50或大网状树脂IR-120；再用合适的溶剂，如稀NH₄OH溶液，将活性物质从树脂上洗脱下来，浓缩后将其吸附在一个大网状树脂上，如Diaion HP-20和大网状树脂XAD-4上，然后用合适的溶剂洗脱，得到A82846，并公开了，采用同样的方法步骤分离得到个别组分 A82846A, A82846B, A82846C。该方法多次从树脂上洗脱分离，操作方法繁琐，有机溶剂用量大，需要处理大量废液。

综上所述，现有技术普遍存在如下缺点：1）总收率低，对工业生产效率产生影响；2）需要多步树脂分离等工艺，增加了操作步骤和生产成本，且需要更多的有机溶剂，对操作人员的身体健康构成威胁，且对环境造成污染，不适合工业化大规模生产；3）现有技术中公开的方法均涉及采用采用阳离子交换树脂进行吸附，发明人通过大量多次试验研究发现，阳离子树脂的吸附效率非常低，出现吸附不上去，漏吸附现象，导致收率降低；并且，色素无法除去。

因此，本领域急需找到一种高纯度的奥利万星关键中间体A82846B的制备方法，降低生产成本，简化操作步骤，降低环境污染，提高收率，满足工业化生产的需求。

发明内容

为了达到上述目的，本发明提供了一种高纯度奥利万星关键中间体A82846B的制备方法，包括以下步骤：

一种高纯度奥利万星关键中间体A82846B的制备方法，包括以下步骤：